脂氧素A4類似物L(fēng)XA4-ME對(duì)急性壞死性胰腺炎大鼠的保護(hù)作用及其機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、第一部分大鼠急性壞死性胰腺炎模型的建立及評(píng)估
　　 目的：建立和評(píng)估符合臨床上重癥急性胰腺炎(severe acute pancreatitis，SAP)合并多器官功能障礙(multiple organs dysfunction syndrome，MODS)/多器官功能衰竭(multiple organ failure，MOF)特點(diǎn)的急性壞死性胰腺炎(acute necrotizingpancreatitis，ANP)大鼠模型。

2、
　　 方法：將SD大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組及急性壞死性胰腺炎組(ANP組)，每組40只。采用3.6％水合氯醛(10mL/kg)腹腔注射麻醉，逆胰膽管注射5％牛磺膽酸鈉(1mL/kg)建立ANP模型，分別于術(shù)后12h及24h2個(gè)時(shí)間點(diǎn)采用腹主動(dòng)脈放血法將大鼠分批處死(每個(gè)時(shí)間點(diǎn)20只)。整個(gè)過程作以下分析：
　　 1.大鼠一般情況觀察
　　 2.測定腹水量
　　 3.獲取血清分為二份：全自動(dòng)生化儀檢測血清淀粉

3、酶(Amylase，AMY)、總膽紅素(Total bilirubin，TBIL)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(alanine aminotransferase，ALT)、血肌酐(Serumcreatine，SCR)、尿素氮(Blood urea nitrogen，BUN)水平。
　　 4.取胰腺、肝臟及肺臟組織，制作石蠟切片，行HE染色，光鏡下對(duì)其進(jìn)行病理學(xué)評(píng)分。
　　 結(jié)果：
　　 1.ANP組大鼠腹水量于12h、24h時(shí)間

4、點(diǎn)較假手術(shù)組相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)明顯增多(P<0.01)。
　　 2.全自動(dòng)生化儀檢測AMY、TBIL、ALT、SCR及BUN水平結(jié)果如下：
　　 ①ANP組大鼠AMY水平于12h、24h時(shí)間點(diǎn)較假手術(shù)組相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)明顯升高(P<0.01)。
　　 ②ANP組大鼠血清TBIL水平于12h、24h時(shí)間點(diǎn)較假手術(shù)組相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)明顯升高(P<0.01)。
　　 ③ANP組大鼠血清ALT水平于12h、24h時(shí)間點(diǎn)較假手術(shù)組相應(yīng)

5、時(shí)間點(diǎn)明顯升高(P<0.01)。
　　 ④ANP組大鼠SCR水平于12h、24h時(shí)間點(diǎn)較假手術(shù)組相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)明顯升高(P<0.01)。
　　 ⑤ANP組大鼠血BUN水平于12h、24h時(shí)間點(diǎn)較假手術(shù)組相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)明顯升高(P<0.01)。
　　 3.胰腺、肝臟及肺組織的病理學(xué)變化
　　 ①ANP組大鼠有明顯的胰腺損傷，包括組織水腫、廣泛出血、壞死。病理學(xué)評(píng)分于12h、24h時(shí)間點(diǎn)較假手術(shù)組相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)明顯升高(

6、P<0.01)。
　　 ②ANP組大鼠肝臟組織存在肝細(xì)胞腫脹、變性等變化，肝臟組織病理學(xué)評(píng)分于12h、24h時(shí)間點(diǎn)較假手術(shù)組相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)明顯升高(P<0.01)。
　　 ③ANP組大鼠肺臟組織存在肺泡腔明顯滲出、炎性細(xì)胞浸潤等變化，肺臟組織病理學(xué)評(píng)分于12h、24h時(shí)間點(diǎn)較假手術(shù)組相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)明顯升高(P<0.01)。
　　 結(jié)論：
　　 逆胰膽管注射5％?；悄懰徕c誘導(dǎo)大鼠ANP模型，符合ANP的胰腺病理學(xué)改

7、變，該模型合并肝臟、肺臟等多臟器功能損傷，比較符合人類SAP或SAP合并MODS/MOF臨床表現(xiàn)，造模成功率高，且模型相對(duì)穩(wěn)定。
　　 第二部分 LXA4-ME對(duì)大鼠急性壞死性胰腺炎的保護(hù)作用及其可能作用機(jī)制
　　 目的：探討內(nèi)源性抗炎介質(zhì)脂氧素A4(Lipoxin A4，LXA4)類似物(LipoxinA4-methyl ester，LXA4-ME)對(duì)急性壞死性胰腺炎(acute necrotizing pancrea

8、titis，ANP)大鼠的保護(hù)作用及其可能的作用機(jī)制。
　　 方法：將SD大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組(S組)、急性壞死性胰腺炎組(ANP組或M組)及LXA4-ME治療組(LXA4-ME組或T組)，每組40只。采用3.6％水合氯(10ml/kg)腹腔注射麻醉，逆胰膽管注射5％?；悄懰徕c(1ml/kg)建立ANP模型。LXA4-ME組在造模后尾靜脈注射含LXA4-ME(87.5ug/kg)的生理鹽水1mL。假手術(shù)組及ANP組造模后經(jīng)尾靜脈

9、注射等量生理鹽水。分別于術(shù)后12h及24h2個(gè)時(shí)間點(diǎn)采用腹主動(dòng)脈放血法將大鼠分批處死(每組各時(shí)段20只)，整個(gè)過程作以下分析：
　　 1.大鼠一般情況觀察
　　 2.獲取血清分為二份：①全自動(dòng)生化儀檢測血AMY水平。②ELISA方法檢測血清腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、可溶性E-選擇素(sE-selectin)水平。
　　 3.取胰腺組織，分為四份：①石蠟切片行HE染色，進(jìn)行胰腺組織鏡下病理評(píng)分；②比色法檢測胰

10、腺組織髓過氧化物酶(myeloperoxidase，MPO)活性及丙二醛(malondialdehyde，MDA)水平：⑧運(yùn)用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)(RT-PCR)檢測胰腺組織中TNF-α、E-selectin、核因子-κB(nuclear factor-κB，NF-κB)p65 mRNA表達(dá)：④應(yīng)用免疫組化技術(shù)(S-P法)檢測胰腺組織中NF-κB p65蛋白的表達(dá)。
　　 結(jié)果：
　　 1.ANP組大鼠在造模后表現(xiàn)同

11、第一部分所描述，LXA4-ME組大鼠的一般情況較ANP組有所好轉(zhuǎn)，死亡率降低，有顯著差異(P<0.05)。
　　 2.全自動(dòng)生化儀檢測AMY水平
　　 在造模后12、24小時(shí)兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)，ANP組AMY水平明顯升高。LXA4-ME組大鼠12h、24h時(shí)間點(diǎn)血AMY值較ANP組相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)明顯減小(P<0.05)。
　　 3.ELISA方法檢測血TNF-α及sE-selectin水平
　　 ①在造模后12h、2

12、4h兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)，LXA4-ME組12h、24h時(shí)間點(diǎn)血清TNF-α水平較ANP組相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)明顯下降(P<0.05)。
　　 ②在造模后12h、24h兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)，LXA4-ME組12h、24h時(shí)間點(diǎn)血清sE-selectin水平較ANP組相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)明顯下降(P<0.05)。
　　 4.胰腺組織病理學(xué)評(píng)分
　　 LXA4-ME組12h、24h時(shí)間點(diǎn)胰腺病理學(xué)評(píng)分?jǐn)?shù)值較ANP組相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)明顯減小(P<0.05)

13、　　 5.胰腺組織MPO活性及MDA水平
　　 ①在造模后12h、24h兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)，ANP組大鼠胰腺組織MPO活性較假手術(shù)組明顯增加(P<0.01)。LXA4-ME組12h、24h時(shí)間點(diǎn)胰腺組織MPO活性較ANP組相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)明顯減小(P<0.05)。
　　 ②在造模后12h、24h兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)，ANP組胰腺組織MDA水平較假手術(shù)組MDA水平明顯增加(P<0.01)。LXA4-ME組12h、24h時(shí)間點(diǎn)胰腺組織MDA水平較

14、ANP組相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)明顯下降(P<0.05)。
　　 6.胰腺組織TNF-α mRNA、E-selectin mRNA、NF-κB p65 mRNA表達(dá)水平
　　 假手術(shù)組大鼠胰腺組織TNF-α mRNA、E-selectin mRNA、NF-κB p65 mRNA表達(dá)極低，ANP組大鼠中上述指標(biāo)在12h、24h時(shí)間點(diǎn)表達(dá)明顯增多(P<0.01)，LXA4-ME組12h、24h時(shí)間點(diǎn)TNF-αmRNA、E-selectin

15、 mRNA、NF-κB p65 mRNA與ANP組相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)相比表達(dá)有所減少(P<0.05)。
　　 7.免疫組化檢測NF-κB p65蛋白表達(dá)
　　 假手術(shù)組胰腺組織中NF-κB p65蛋白幾乎無陽性表達(dá)，ANP組大鼠胰腺組織中可見較多的NF-κB p65蛋白表達(dá)(P<0.01)，其在造模后12h、24h時(shí)間點(diǎn)無明顯差異，LXA4-ME組大鼠胰腺組織NF-κB p65蛋白表達(dá)有所減少，均低于相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)模型組，有顯著性差

16、異(P<0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1.5％牛磺膽酸鈉所致ANP大鼠模型中，可以觀察到中性粒細(xì)胞浸潤明顯增加，氧自由基水平增加，胰腺組織及血清促炎因子TNF-α及粘附分子E-selectin表達(dá)增加，胰腺組織NF-κB激活。
　　 2.LXA4-ME能夠顯著減輕ANP大鼠胰腺的病理學(xué)損傷，減少腹水量，降低大鼠死亡率，降低血AMY水平。其機(jī)制考慮與LXA4-ME減輕ANP的中性粒細(xì)胞浸潤、降低氧化應(yīng)激水平、減