丙酮酸乙酯對急性壞死性胰腺炎大鼠急性肺損傷保護(hù)作用的實驗研究.pdf

1、本文擬通過建立簡便、易復(fù)制、重復(fù)性好的急性壞死性胰腺炎(acute necrotizing pancreatitis，ANP)并發(fā)性肺損傷動物模型，探討急性壞死性胰腺炎肺損傷的發(fā)病機(jī)制；觀察丙酮酸乙酯延遲應(yīng)用是否可減輕急性壞死性胰腺炎肺損傷及可能作用機(jī)制；并研究大鼠肺組織高遷移率族蛋白B1的表達(dá)在急性壞死性胰腺炎肺損傷中的作用及意義。 研究方法： 1、實驗動物模型的建立及取材：健康雄性Wistar大鼠72只，體重220～

2、250g，隨機(jī)分為三組：假手術(shù)組(SO)、ANP組及EP治療組。ANP組及EP治療組大鼠予逆行性胰膽管注射5％?；悄懰徕c制作ANP模型，假手術(shù)組大鼠僅開腹并翻動十二指腸數(shù)次；EP治療組于制模后經(jīng)尾靜脈或股靜脈延遲給予EP溶液(EP溶于乳酸鈉林格液中，28mM)，每次劑量為40mg/kg。各組大鼠分別于制模后6h、12h及24h取材。 2、酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測血清TNF-α和IL-6水平； 3、比色法檢測肺組織

3、的髓過氧化物酶(MPO)水平、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)活力； 4、半定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)法檢測肺組織HMGB1 mRNA表達(dá)：用經(jīng)典的Trizol法進(jìn)行肺組織RNA提取，定量后以其為模板逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA第一鏈，然后用HMGB1引物進(jìn)行PCR.擴(kuò)增，產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行檢測； 5、生化法檢測血清淀粉酶、血氧變化及觀察胰腺、肺組織大體及光鏡下的病理變化。 研究結(jié)果：

4、1、隨著制模時間的延長，ANP組大鼠血清淀粉酶逐漸升高，腹水量逐漸增加，各時相點動物的胰腺組織均存在不同程度的間質(zhì)水腫、炎細(xì)胞浸潤、灶性或片狀出血壞死，胰腺及周圍組織出現(xiàn)脂肪壞死及皂化斑，并伴血性腹水，呈典型的ANP病理改變；同時肺組織在各時相點形態(tài)上出現(xiàn)了不同程度的炎細(xì)胞浸潤及肺間質(zhì)、肺泡水腫、出血、灶性或大片肺不張等典型的ALI病理改變；在功能方面，PaO<,2>進(jìn)行性下降； 2、ANP組大鼠肺組織的髓過氧化物酶(MPO)活

5、性隨著制模時間的延長而升高，EP治療組與ANP組相比較，肺組織MPO水平均較低，且各時點均有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)； 3、ANP組血清TNF-α和IL-6水平在制模后6h達(dá)高峰，12h下降，在此兩時點治療組血清TNF-α和IL-6水平明顯低于ANP組(P<0.05)； 4、ANP組肺組織HMGB1 mRNA表達(dá)水平在制模后12h明顯升高，至24h仍維持在高水平，治療組肺組織HMGB1 mRNA表達(dá)水平在制模后12、2

6、4h明顯低于ANP組(P<0.05)； 5、ANP組大鼠肺組織的丙二醛(MDA)水平隨著制模時間的延長而升高，而SOD活力則逐漸降低；EP治療組與ANP組相比較，肺組織。MDA水平均較低，且在6h及12h組有統(tǒng)計學(xué)差異，SOD活力則均高于ANP組，且各時點均有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)。 6、同期胰腺、肺病理改變治療組比ANP組明顯減輕，且PaO<,2>均明顯高于ANP組。 研究結(jié)論： 1、逆行性膽胰管注

7、射?；悄懰徕c誘導(dǎo)ANP并發(fā)ALI的大鼠模型是成功的，本模型操作方法簡單，重復(fù)性好。本模型之ANP早期就合并急性肺損傷，表現(xiàn)為肺組織的炎癥浸潤并有功能障礙。 2、?；悄懰徕c誘導(dǎo)ANP發(fā)生后，可能通過活性胰酶的釋放和中性粒細(xì)胞、單核巨噬細(xì)胞的激活，釋放大量損害性炎性介質(zhì)包括細(xì)胞因子如TNF-α、IL-6等，通過炎癥介質(zhì)作用導(dǎo)致中性粒細(xì)胞等炎癥細(xì)胞在肺部浸潤、聚集活化，釋放多種損傷因子如多種促炎細(xì)胞因子(TNF-α、HMGB1等)及氧

8、自由基等有害物質(zhì)直接作用于肺組織而致?lián)p傷。 3、?；悄懰徕c誘導(dǎo)ANP發(fā)生后，肺組織HMGB1表達(dá)增高較晚且持續(xù)時間長，因而可能成為ANPALI防治切實可行的潛在干預(yù)目標(biāo)，能給ANPALI提供更廣的治療窗。 4、丙酮酸乙酯具有抗氧化作用，且能明顯抑制ANP肺損傷大鼠早期和晚期促炎細(xì)胞因子的釋放和表達(dá)(TNF-α、IL-6、HMGB1)，減輕肺組織病理損傷程度。與其他專門調(diào)控單一細(xì)胞因子的重組蛋白相比，丙酮酸乙酯在ANP肺損