促紅細(xì)胞生成素對膿毒癥大鼠心肌損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制的相關(guān)性研究.pdf

1、目的：探討促紅細(xì)胞生成素(EPO)對膿毒癥大鼠心肌損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制。
　　方法：健康昆明小鼠146只，隨機(jī)，雙盲分為4組：假手術(shù)組(Sham組n=35，開腹后不做任何處理)、羅氏芬組(Roc組n=35，模型復(fù)制后立即腹腔內(nèi)注射羅氏芬1mg/20g)、EPO干預(yù)組(EPO組n=35，模型復(fù)制后立即腹腔內(nèi)注射EPO1000IU/kg)和膿毒癥組(CLP組n=35，行盲腸結(jié)扎穿孔術(shù))，觀察昆明小鼠盲腸結(jié)扎穿孔術(shù)后7天死亡率。健康S

2、D大鼠252只，隨機(jī)、雙盲分為3組：假手術(shù)組(n=8 Sham組，開腹后不做任何處理)、EPO干預(yù)組(n=8 EPO組，模型復(fù)制后立即腹腔內(nèi)注射EPO1000IU/kg)、膿毒癥組(n=8 CLP組，行盲腸結(jié)扎穿孔術(shù))。盲腸結(jié)扎穿孔術(shù)后開始計時，在術(shù)后0h、3h、6h、12h、24h于右側(cè)頸總動脈插入接有壓力轉(zhuǎn)換器的導(dǎo)管，記錄左心室壓力變化曲線，計算左室收縮壓(LVSP)、左室壓力上升最大速度(+dp/dtmax)、左室壓力下降最大速度

3、(-dp/dtmax)。于術(shù)后0h、3h、6h、12h、24h經(jīng)下腔靜脈采血，應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)測定血清C-反應(yīng)蛋白水平(CRP)、腫瘤壞死因子-a(TNF-a)、白介素-6(IL-6)、白介素-10(IL-10)、肌鈣蛋白Ⅰ(cTNI)、肌酸激酶(CK)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)和乳酸脫氫酶(LDH)水平。應(yīng)用流式細(xì)胞儀，羅丹明123標(biāo)記檢測心肌細(xì)胞線粒體膜電位；Annexin-V-FITC法檢測心肌細(xì)胞凋亡及心肌組織核因子-KB(NF

4、-KB p65)表達(dá)水平。光鏡下觀察大鼠心、肝、腎、肺的形態(tài)學(xué)變化。
　　數(shù)據(jù)處理采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件包，各項(xiàng)指標(biāo)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(x-±s)表示，統(tǒng)計學(xué)軟件對組間差異做獨(dú)立樣本雙側(cè)t檢驗(yàn)，P<0.05表示差異有顯著意義，P<0.01表示差異有非常顯著意義。
　　結(jié)果：所有膿毒癥組動物均出現(xiàn)心率、呼吸加快，體溫上升，精神反應(yīng)差，嗜睡，豎毛，等內(nèi)毒素血癥狀態(tài)。觀察昆明小鼠盲腸結(jié)扎穿孔術(shù)后死亡率，Sham組術(shù)后3h左右恢

5、復(fù)至正常狀態(tài)，Roc組及EPO組昆明小鼠較CLP組在24h、48h死亡率明顯降低，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。膿毒癥SD大鼠的LVSP及左室+dp/dtmax、-dp/dtmax較Sham組大鼠降低，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)，表明膿毒癥顯著影響大鼠左心舒縮功能。CLP組大鼠在3h即出現(xiàn)LVSP，+dp/dt max和-dp/dt max指標(biāo)下降，在6h時達(dá)最低(67.4±6.1)mmHg，(2821±372.6)mmH

6、g/s，(-1351±151.3)mmHg/s，均低于Sham組(189.5±3.6)mmHg，(6021±103.6)mmHg/s，(-5245±176.3)mmHg/s，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。EPO組大鼠較CLP組相比，LVSP、+dp/dtmax及-dp/dtmax均有所恢復(fù)，在3h、6h、12h及24h高于CLP組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。CLP組和EPO組大鼠各時點(diǎn)血清炎性介質(zhì)指標(biāo)CRP、TNF-a、

7、IL-6、IL-10，心肌酶學(xué)指標(biāo)cTNI、CK、AST、LDH水平均較Sham組顯著升高(P<0.05)，應(yīng)用EPO后，EPO組的上述指標(biāo)較CLP組相比均有不同程度降低，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。CLP組、EPO組心肌細(xì)胞早期凋亡率(8.54±1.33)％、(1.81±0.79)％與Sham組(0.27±0.31)％比較均升高，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)，其中EPO組的細(xì)胞早期凋亡率低于CLP組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(

8、P<0.01)。Sham組、EPO組及CLP組心肌線粒體膜電位分別為(340.42±25.90)、(286.25±24.02)及(192.26±23.69)，CLP組及EPO組大鼠的心肌細(xì)胞熒光峰明顯左移，亦即線粒體膜電位降低的細(xì)胞明顯增多，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。在應(yīng)用EPO干預(yù)后，EPO組較CLP組的心肌細(xì)胞熒光峰明顯右移，亦即明顯改善線粒體膜電位降低。EPO組、CLP組心肌組織NF-KB p65表達(dá)(276.23±28

9、.04)、(442.04±62.26)均高于Sham組(171.59±16.71)，其中EPO組的NF-KB p65表達(dá)低于CLP組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。應(yīng)用EPO干預(yù)后，主要臟器損害的病理改變較膿毒癥組顯著減輕。
　　結(jié)論：EPO能減輕膿毒癥大鼠心肌損害，具有保護(hù)性作用；EPO可以抑制致炎因子TNF-a、IL-6，提高抗炎因子IL-10水平，減輕心肌炎癥反應(yīng)；EPO可以改善線粒體膜電位的降低，具有對抗膿毒癥大鼠心