膠束溶劑堆積在線富集-毛細(xì)管電泳法在中藥材成分分析中的應(yīng)用.pdf

1、中藥材是我國重要的農(nóng)產(chǎn)品之一。中藥材的發(fā)展是幾千年來中華民族智慧的結(jié)晶，為人類的健康做出了巨大的貢獻(xiàn)。目前我國對中藥材的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)常常僅限于鑒別外觀、性狀檢查，很少對其中的有效成分進(jìn)行檢測。因此，中藥材的質(zhì)量控制成為其走向現(xiàn)代化和國際化的瓶頸。對于中藥材中活性成分的定量分析，毛細(xì)管電泳法(CE)是較為常用的方法。
　　CE具有分離效率高、分析速度快、樣品用量少、應(yīng)用范圍廣等優(yōu)點，是分離科學(xué)中研究最為活躍的領(lǐng)域之一。但由于其靈敏度較低

2、，從而限制了其在痕量物質(zhì)分析中的應(yīng)用，所以提高CE檢測的靈敏度一直是人們密切關(guān)注的課題。采用在線富集技術(shù)是解決CE檢測靈敏度低的一個簡單且行之有效的途徑。膠束溶劑堆積(MSS)，是一種新型毛細(xì)管電泳在線富集技術(shù)，它能夠應(yīng)用于多種毛細(xì)管電泳分離模式，且能和其它在線富集技術(shù)聯(lián)用。在系統(tǒng)查閱大量相關(guān)文獻(xiàn)資料的基礎(chǔ)上，進(jìn)行了以下研究工作:
　　(1)應(yīng)用推掃和MSS兩種在線富集技術(shù)，在毛細(xì)管區(qū)帶電泳(CZE)模式下，建立了中藥材中有機酸的

3、測定新方法。本試驗探討了MSS對有機陰離子的富集過程。對富集和分離的影響因素進(jìn)行了優(yōu)化。最終確定最優(yōu)條件為:BGS為50 mmol/L乙酸銨(pH12.0)中含有50％甲醇(v/v);膠束溶液為12 mmol/L十六烷基三甲基溴化銨(CTAB)和20 mmol/L乙酸銨混合溶液;樣品基質(zhì)為20 mmol/L乙酸銨;分離電壓為-20 kV;在最優(yōu)條件下，測定了當(dāng)歸和胡黃連兩種中藥材的香草酸、阿魏酸和肉桂酸的含量，加標(biāo)回收率在80.8％～1

4、19.6％之間。檢出限(S/N=3)為0.03～0.06μg/mL。富集倍率為42倍至77倍。本方法準(zhǔn)確、可靠，靈敏度得到提高，適合中藥材中有機酸含量的分析測定。
　　(2)建立了推掃-MSS-CZE法測定中藥中士的寧和馬錢子堿兩種生物堿的新方法。本實驗探索了富集的機理，對影響分離和富集效率的因素進(jìn)行了優(yōu)化。BGS為75 mmol/L磷酸(pH2.5)和30％甲醇(v/v)混合溶液。檢測波長為203 nm。結(jié)果表明，士的寧和馬錢子

5、堿在(0.1～5)μg/mL線性關(guān)系良好，線性相關(guān)系數(shù)分別為0.9998和0.9997，檢出限（S/N=3）均低至0.01μg/mL，與常規(guī)CZE方法相比分別富集了51和38倍，二者加標(biāo)回收率均在94.2％～105.4％之間。本方法分析時間短、靈敏度高、操作簡單、對環(huán)境污染小，適合中藥中士的寧和馬錢子堿的檢測。
　　(3)應(yīng)用推掃-MSS兩種毛細(xì)管在線富集技術(shù)，建立了喹諾里西啶類生物堿（槐果堿、苦參堿和氧化苦參堿）的測定新方法。對

6、分離和富集的影響因素進(jìn)行了優(yōu)化，最終確定最佳條件為:BGS為50 mmol/L乙酸銨(pH8.5)中含有40％的甲醇(v/v);膠束溶液為15 mmol/L十二烷基硫酸鈉(SDS)和10 mmol/L乙酸銨(pH2.0)的混合溶液;樣品基質(zhì)為15 mmol/L乙酸銨(pH2.0);0.5 psi下膠束溶液進(jìn)樣30 s，之后再進(jìn)90 s樣品;分離電壓為20 kV;檢測波長為200 nm。在最優(yōu)條件下，與常規(guī)CZE相比三種生物堿富集了42倍

7、至52倍。在(0.1～10.0)μg/mL之間，槐果堿、苦參堿和氧化苦參堿線性關(guān)系良好，線性回歸系數(shù)為0.9992～0.9996，檢出限（S/N=3)為(0.02～0.03)μg/mL。日內(nèi)(n=8)和日間（n=5）精密度良好，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSDs)均低于9.5％。本方法準(zhǔn)確可靠，中藥樣品中加標(biāo)回收率為87.5％～109.0％。
　　(4)本實驗將場放大進(jìn)樣(FASI)和MSS兩種在線宦集技術(shù)聯(lián)用，在毛細(xì)管區(qū)帶電泳分離模式下對人

8、尿樣中三種中藥材活性成分（小檗堿、巴馬汀和藥根堿）進(jìn)行了分離和測定?；惫麎A作為內(nèi)標(biāo)物，對影響分離和富集效果的因素進(jìn)行了優(yōu)化。最終確定條件為:背景緩沖溶液為75 mmol/L碳酸氫銨中含40％甲醇(v/v)，膠束溶液為15 mmol/L碳酸氫銨和7mmol/L的SDS混合溶液，樣品基質(zhì)為40％的甲醇水溶液。分離電壓為20 kV;檢測波長為260 nm。在最優(yōu)條件下，此方法的富集倍率達(dá)到314倍至405倍。小檗堿，巴馬汀和藥根堿在(0.05

9、～10.0)μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，線性相關(guān)系數(shù)為0.9992～0.9998。檢出限(S/N=3)為(5～10) ng/mL。本方法的日內(nèi)（n=6）和日間（n=4）精密度良好，RSDs均低于9.3％。實際尿樣的加標(biāo)回收率在85.2％至105.5％之間。該法具有簡單快速、準(zhǔn)確可靠、靈敏度高等優(yōu)點。
　　(5)應(yīng)用FASI和MSS兩步堆積，建立了人尿樣中兩種中藥活性成分（士的寧和馬錢子堿）的毛細(xì)管區(qū)帶電泳測定新方法。對影響分離和

10、富集的因素進(jìn)行了優(yōu)化，最終確定最優(yōu)條件為:BGS為75 mmol/L乙酸銨中含20％甲醇(v/v);膠束溶液為15 mmol/L SDS與30 mmol/L乙酸銨;樣品基質(zhì)為60％甲醇水溶液;分離電壓為20kV;該方法士的寧和馬錢子堿在(10～1000) ng/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，線性相關(guān)系數(shù)分別為0.9985和0.9945。與常規(guī)毛細(xì)管區(qū)帶電泳相比，本方法的富集倍率達(dá)1590倍至1638倍，士的寧和馬錢子堿的檢出限（S/N=3）低

11、至2.5和4.0 ng/mL，靈敏度得到很大提高。本方法簡單、準(zhǔn)確、可靠，適合應(yīng)用于尿樣中生物堿的測定。
　　(6)應(yīng)用MSS毛細(xì)管電泳在線富集技術(shù)，建立了苯海拉明、氯苯那敏、異丙嗪的測定方法。本實驗對影響MSS富集效率的因素進(jìn)行了優(yōu)化。背景緩沖溶液:30mmol/L磷酸二氫鈉(pH7.5)和55％甲醇(v/v);樣品溶液:10 mmol/L SDS和10mmol/L磷酸二氫鈉(pH2.5);0.5 psi下進(jìn)樣60 s;檢測波長

12、為200nm。結(jié)果表明，苯海拉明、氯苯那敏、異丙嗪在0.6～60.0μg/mL濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，線性相關(guān)系數(shù)分別為0.9996、0.9996和0.9971，檢出限（S/N=3）分別低至0.1μg/mL、0.2μg/mL和0.2μg/mL。三者的加標(biāo)回收率分別為92.5％～107.2％、89.7％～102.7％和100.7％～108.0％。日內(nèi)和日間精密度較好，RSDs均小于9，1％。與常規(guī)毛細(xì)管區(qū)帶電泳相比，本方法對三種待測物的富