應(yīng)用LAMP檢測技術(shù)快速診斷大豆根莖部真菌病害.pdf

1、大豆是原產(chǎn)于我國的一年生的草本植物，現(xiàn)在世界各地都有栽培。大豆也是一種多病害植物，大豆根莖部病害是影響大豆產(chǎn)量和品質(zhì)的重要因素之一，其分布廣泛、病原菌種類復(fù)雜，危害嚴(yán)重，較難防治。特別是感病初期，癥狀相似度極高，不易區(qū)分。傳統(tǒng)的診斷方法費(fèi)力、耗時(shí)長，且容易造成誤診，不利于及時(shí)指導(dǎo)防治。所以急需要開發(fā)一些新技術(shù)對引起大豆根部病害的不同病原菌進(jìn)行快速檢測。目前對植物病原菌的分子檢測需將田間采集的病害樣本帶回實(shí)驗(yàn)室用PCR儀來完成，耗時(shí)長，難

2、以達(dá)到在田間現(xiàn)場對植物病害進(jìn)行快速診斷的需求，不利于對病害進(jìn)行指導(dǎo)及時(shí)防治。本試驗(yàn)研發(fā)了一套簡便，快速，安全，且檢測成本低能在田間現(xiàn)場快速診斷病害的LAMP方法，為實(shí)行田間現(xiàn)場快速診斷病害提供了必要的技術(shù)支持。
　　1.應(yīng)用本實(shí)驗(yàn)室研發(fā)的分別針對尖鐮孢菌(Fusarium oxysporum)、茄腐鐮孢菌(Fusarium solani)、層出鐮孢菌(Fusarium proliferatum)、木賊鐮孢菌(Fusariumequ

3、iseti)、禾谷鐮孢菌(Fusarium graminearum)、立枯絲核菌（Rhizoctonia solani）和菜豆殼球孢菌(Macrophomina phaseolina)的7個(gè)LAMP檢測體系對從江蘇省、安徽省、湖北省和云南省采集的640份病害樣本進(jìn)行快速病害診斷。LAMP檢測陽性率分別為:20％、27％、12％、7％、4％、10％和13％;安徽省和江蘇省復(fù)合侵染情況比較嚴(yán)重，占檢測陽性率31％，其中由兩種病原菌侵染的病害

4、樣本和由三種病原菌侵染的病害樣本分別為6％、24％，尖鐮孢菌和茄腐鐮孢菌為該地區(qū)的優(yōu)勢種，其次為層出鐮孢菌和木賦鐮孢菌。采用LAMP檢測技術(shù)在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)完成病害診斷僅需1.5～2 h，與傳統(tǒng)診斷、普通分子技術(shù)診斷相比較，該技術(shù)簡便，快速，安全，檢測成本低。在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上十分有利于對病害進(jìn)行指導(dǎo)及時(shí)防治。
　　2.本試驗(yàn)根據(jù)LAMP檢測技術(shù)在恒溫條件下進(jìn)行反應(yīng)這一特點(diǎn)，通過反復(fù)探索設(shè)計(jì)了一套簡易的，實(shí)用的用保溫杯來替代PCR儀提供恒溫（