Fucoidan對人胃腺癌SGC7901細胞誘導的淋巴管生成的抑制作用.pdf

1、目的:
　　胃癌是一種嚴重威脅人類健康的惡性腫瘤，胃癌轉移被認為是胃癌難以治愈的主要原因。胃癌轉移方式有多種，淋巴道轉移是其中一種主要方式。淋巴管內皮細胞的增殖、遷移和管腔形成構成了腫瘤淋巴道轉移的重要環(huán)節(jié)即腫瘤誘導的淋巴管新生。靶向胃癌誘導的淋巴管新生促進淋巴道的轉移在扼制胃癌發(fā)展方面有著至關重要的作用。在腫瘤轉移中，腫瘤微環(huán)境中的腫瘤細胞與淋巴管內皮細胞之間的相互作用影響著淋巴管的生成以及腫瘤細胞的侵襲轉移。腫瘤沿淋巴道轉移細

2、胞分子機制和相關藥物研制已成為新的研究熱點。
　　褐藻多糖硫酸酯(fucoidan)是一種含有豐富硫酸基團的，具有多種生物學活性的海洋褐藻類多糖。研究發(fā)現(xiàn)，fucoidan在抗腫瘤方面有著良好的效果，并且與傳統(tǒng)的化療藥物相比較，因其產自天然所以毒副作用較小。
　　血管內皮生長因子C(VEGF-C)及其受體血管內皮細胞生長因子受體3(VEGFR-3)是促進淋巴管新生的重要因素?；|金屬蛋白酶2(MMP-2)、基質金屬蛋白酶9(

3、MMP-9)和金屬蛋白酶組織抑制因子-1(TIMP-1)參與降解細胞外基質進而導致腫瘤的侵襲轉移。PI3K/Akt/NF-κB信號通路是一條與細胞增殖、遷移和侵襲密切相關的信號通路，能夠促進腫瘤的發(fā)生發(fā)展。趨化因子1(CXCL1)是一種能夠促進腫瘤侵襲和進一步提高惡性腫瘤轉移的趨化因子。
　　方法:
　　1.采用MTT法檢測fucoidan對SGC7901細胞活力的影響，同時通過流式細胞術(Flow cytometry)檢測

4、fucoidan對SGC7901細胞周期的影響。
　　2.采用Transwell小室法檢測fucoidan對SGC7901細胞遷移和侵襲能力的影響。
　　3.采用ELISA法檢測fucoidan對SGC7901細胞分泌的MMP-2，MMP-9，TIMP-1和VEGF-C的影響，采用RT-PCR法檢測fucoidan對SGC7901細胞VEGF-CmRNA水平的影響。
　　4.Western blot檢測fucoidan

5、對SGC7901細胞中信號通路NF-κB/PI3K/Akt的影響。
　　5.采用共培養(yǎng)方法檢測fucoidan對SGC7901細胞對HLEC細胞管樣結構形成能力的影響，采用Western blot檢測共培養(yǎng)體系下，fucoidan對HLEC細胞中VEGFR-3和p-AKT蛋白水平的影響。
　　6.Transwell小室法檢測CXCL1對SGC7901細胞侵襲能力的影響，ELISA法檢測fucoidan作用下CXCL1對SGC

6、7901細胞MMP-2的分泌的影響，免疫熒光法檢測fucoidan對裸鼠體內CXCL1的表達水平的影響。
　　7.SGC7901胃腺癌細胞建立裸鼠腫瘤模型，免疫熒光雙標記法檢測fucoidan對裸鼠胃腺癌生長以及淋巴管密度(LVD)的影響。
　　結果:
　　1.MTT實驗結果表明fucoidan抑制SGC7901細胞活力。流式細胞術結果顯示，fucoidan通過阻滯G0/G1期使細胞無法轉向S期而產生抑制作用。

7、　　2.Transwell實驗結果顯示fucoidan抑制SGC7901細胞遷移侵襲能力。
　　3.ELISA實驗結果表明fucoidan抑制SGC7901細胞MMP-2，MMP-9，TIMP-1和VEGF-C的分泌。RT-PCR結果顯示在mRNA水平，fucoidan抑制vegf-c的表達。
　　4.Western blot法檢測結果表明fucoidan能夠下調PI3K,Akt磷酸化水平的表達以及NF-κB蛋白表達從而影響

8、PI3K/Akt/NF-κB信號通路的表達。
　　5.共培養(yǎng)條件下，成管實驗結果顯示fucoidan能夠抑制SGC7901細胞與HLEC細胞共培養(yǎng)下HLEC細胞的成管能力。Western blot結果顯示fucoidan下調HLEC中VEGFR-3和p-AKT表達。
　　6.Transwell和ELISA實驗結果表明fucoidan抑制CXCL1對SGC7901細胞侵襲的促進作用，免疫熒光實驗顯示fucoidan抑制裸鼠腫瘤