自然衰老小鼠T淋巴細(xì)胞亞群變化及干細(xì)胞治療效果觀察.pdf

1、目的:了解自然衰老小鼠T淋巴細(xì)胞亞群比例及增殖能力的變化，通過(guò)對(duì)年老組小鼠進(jìn)行干細(xì)胞移植治療，觀察分析免疫功能指標(biāo)改善情況，探索用干細(xì)胞治療來(lái)提高免疫功能、延緩衰老的可行性。
　　方法:以自然衰老C57BL/6小鼠為研究對(duì)象，分別檢測(cè)和分析比較2月齡、7月齡和21月齡小鼠外周血中，T淋巴細(xì)胞亞群百分比、脾臟T淋巴細(xì)胞增殖能力變化情況;給21月齡小鼠，通過(guò)尾靜脈注射胎鼠間充質(zhì)干細(xì)胞，觀察其對(duì)衰老小鼠外周血T淋巴細(xì)胞亞群及其脾臟T淋巴

2、細(xì)胞增殖能力的影響。C57BL/6小鼠外周血T淋巴細(xì)胞亞群百分比檢測(cè)，采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)不同年齡組小鼠（Ⅰ組:2月齡;Ⅱ組:7月齡;Ⅲ組:21月齡）外周血中CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞占CD3+T淋巴細(xì)胞的比例，CD8+CD28+、初始性及記憶性CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞占各自亞群的比例。脾臟T淋巴細(xì)胞增殖能力檢測(cè)，以ConA刺激CFSE標(biāo)記的脾臟T淋巴細(xì)胞，用流式細(xì)胞儀檢測(cè)記錄刺激組和未刺激組熒光強(qiáng)度變化，通過(guò)ModFit軟件分析獲

3、得增殖指數(shù)。從懷孕13.5天的雌鼠獲得胎鼠，分離、培養(yǎng)干細(xì)胞，流式細(xì)胞儀鑒定表型，成脂、成骨誘導(dǎo)分化試劑誘導(dǎo)分化后染色鑒定分化能力。給予衰老小鼠干細(xì)胞治療，治療組給予1×106個(gè)細(xì)胞，每周一次，注射三次，一個(gè)月后，檢測(cè)治療組小鼠外周血中T淋巴細(xì)胞亞群比例及其脾臟T淋巴細(xì)胞增殖能力。
　　結(jié)果:
　　1.Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ組小鼠外周血中CD4+T淋巴細(xì)胞比例分別為64.08％、49.71％和47.22％，CD8+T淋巴細(xì)胞比例分別為3

4、3.18％、46.00％和51.10％。和Ⅰ組相比，Ⅱ組和Ⅲ組小鼠CD4+T淋巴細(xì)胞百分比降低，CD8+T淋巴細(xì)胞百分比升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）;而Ⅱ組和Ⅲ組相比，兩個(gè)指標(biāo)的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　2.Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ組小鼠外周血中初始性CD4+T淋巴細(xì)胞比例分別為21.68％、7.44％和10.73％，記憶性CD4+T淋巴細(xì)胞比例分別為8.73％、17.35％和37.47％，初始性CD8+T淋巴細(xì)胞比例分

5、別為43.83％、27.36％和13.92％，記憶性CD8+T淋巴細(xì)胞比例分別為:9.10％、11.31％和32.10％。和Ⅰ組相比，Ⅱ組和Ⅲ組小鼠初始性CD4+和CD8+T比例均顯著下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);Ⅲ組小鼠外周血中記憶性CD4+和CD8+T淋巴細(xì)胞比例上升差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。和Ⅱ組相比，Ⅲ組小鼠外周血中初始性CD8+T淋巴細(xì)胞比例顯著下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);記憶性CD4+和CD8+

6、T淋巴細(xì)胞比例顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　3.Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ組小鼠外周血中CD8+CD28+T淋巴細(xì)胞在其亞群比例分別為24.38％、31.64％和47.67％。和Ⅰ組、和Ⅱ組相比，Ⅲ組小鼠外周血中CD8+CD28+T所占比例顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　4.脾臟T淋巴細(xì)胞刺激增殖指數(shù)，和Ⅰ組相比，Ⅱ組和Ⅲ組小鼠的T淋巴細(xì)胞增殖能力顯著下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05

7、);Ⅱ組和Ⅲ組之間比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05）。
　　5.胎鼠干細(xì)胞CD29表達(dá)為99.9％，CD44表達(dá)為90.3％，SCA-1表達(dá)為85％，CD34表達(dá)為2.9％，CD45表達(dá)為0.5％，CD11b表達(dá)為0.5％。細(xì)胞可以被誘導(dǎo)分化為骨、脂肪細(xì)胞。
　　6.治療組21月齡小鼠外周血中CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞分別為53.12％、46.36％，初始性和記憶CD4+T淋巴細(xì)胞分別為5.84％和53.94％，初始性

8、和記憶CD8+T淋巴細(xì)胞分別為14.98％和32.48％，CD8+CD28+T淋巴細(xì)胞百分比為42.28％。和對(duì)照組21月齡小鼠相比，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05）。
　　7.治療組21月齡T細(xì)胞刺激增殖指數(shù)和對(duì)照組21月齡小鼠相比，呈現(xiàn)下降趨勢(shì)，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　結(jié)論:
　　1.C57BL/6小鼠外周血中CD4+、初始性CD8+、初始性CD8+T淋巴細(xì)胞比例呈增齡性下降，記憶性CD4+、記