椪柑原生質(zhì)培養(yǎng)過程中的氧化脅迫分析.pdf

1、原生質(zhì)體再生成植株是一個(gè)復(fù)雜的發(fā)育過程，包括細(xì)胞壁再生、細(xì)胞伸長(zhǎng)和分裂，隨后進(jìn)入細(xì)胞周期并再生成胚狀體。這個(gè)過程中如果出現(xiàn)逆境，胞內(nèi)會(huì)積累不同程度的活性氧(AOS)，產(chǎn)生氧化脅迫，影響原生質(zhì)體再生成植株。多胺作為抗氧化劑，能清除細(xì)胞中的活性氧，提高抗氧化酶活性，影響細(xì)胞發(fā)育。本文探討了從不同材料中所分離的原生質(zhì)體在細(xì)胞壁再生期間的差異，以及壁再生過程中，多胺對(duì)細(xì)胞應(yīng)對(duì)氧化脅迫的影響。主要研究結(jié)果如下：
　　 1．對(duì)椪柑愈傷組織與

2、葉片酶解、分離原生質(zhì)體，進(jìn)行液體淺層培養(yǎng)，熒光染料Calcofluor White M2R染色觀察不同材料分離原生質(zhì)體細(xì)胞壁再生時(shí)間，觀察結(jié)果表明，愈傷組織分離的原生質(zhì)體在第3d就開始啟動(dòng)細(xì)胞壁再生程序，到第6d完成細(xì)胞壁再生；而葉肉分離的原生質(zhì)體隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，逐漸死亡，無法觀察到細(xì)胞壁的再生。
　　 2．對(duì)愈傷組織與葉片分離的原生質(zhì)體過氧化氫與抗氧化物質(zhì)活力檢測(cè)結(jié)果表明，過氧化氫與抗氧化物質(zhì)的活力變化在兩個(gè)不同材料分離的

3、原生質(zhì)體中出現(xiàn)了廣泛的差異，隨著培養(yǎng)時(shí)間的增加，過氧化氫在不能再生的原生質(zhì)體中逐漸增加，而在能再生的原生質(zhì)體雖然有一定的增加，但是增加幅度明顯少于葉肉分離的原生質(zhì)體中過氧化氫的活力；相應(yīng)的抗氧化酶，在愈傷組織分離的原生質(zhì)體培養(yǎng)過程中都相應(yīng)增加，但是在葉肉分離的原生質(zhì)體培養(yǎng)過程，酶的活力基本保持不變，并有些呈下降的趨勢(shì)。
　　 3．添加D-Arg(10mM)處理的愈傷組織分離的原生質(zhì)體，過氧化氫在原生質(zhì)體隨著培養(yǎng)時(shí)間逐漸增加，相應(yīng)

4、的細(xì)胞體內(nèi)清除酶的活性下降；而在葉肉分離的原生質(zhì)體添加腐胺(10mM)，過氧化氫在植物體內(nèi)持續(xù)積累，清除酶的活性變化不明顯。
　　 4．分離椪柑愈傷組織得到原生質(zhì)體，在培養(yǎng)基中添加外源多胺與多胺抑制劑進(jìn)行培養(yǎng)，熒光增白劑染色觀察表明，添加了外源多胺促使原生質(zhì)體細(xì)胞壁啟動(dòng)提前，而添加多胺抑制劑的相對(duì)延后。
　　 5．對(duì)愈傷組織與葉片進(jìn)行分離得到原生質(zhì)體培養(yǎng)過程中取樣，通過FDA染色檢測(cè)得到，隨著培養(yǎng)時(shí)間的增加，愈傷組織分離