不同劑量質(zhì)粒轉(zhuǎn)染β ARKct對(duì)大鼠心衰模型療效的影響.pdf

1、目的：心力衰竭的研究一直是目前的熱點(diǎn)。近年來，國內(nèi)外已陸續(xù)發(fā)現(xiàn)不少心衰相關(guān)的致病靶標(biāo)，對(duì)心力衰竭的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后的研究早已深入到分子水平。有多項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)，衰竭心臟組織中β腎上腺素受體激酶1(βARK1)的活性異常升高，而運(yùn)用腺病毒轉(zhuǎn)染一種多肽類的βARK1抑制劑(βARKct)，能夠明顯改變?chǔ)履I上腺素能神經(jīng)刺激的反應(yīng)性和改善衰竭心臟的功能。
　　 盡管國內(nèi)近年有不少相關(guān)研究，但總體來說主要局限于心衰模型的建立上，對(duì)心力衰竭的基

2、因治療較少涉及，目前尚無采用質(zhì)粒作為載體轉(zhuǎn)染在體心肌細(xì)胞的報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)研究了基因轉(zhuǎn)染β腎上腺素受體激酶抑制劑(βARKct)對(duì)異丙腎上腺素(ISO，isoproterenol)誘導(dǎo)的心衰大鼠模型心功能的作用，詳細(xì)探討了質(zhì)粒攜帶目的基因進(jìn)行轉(zhuǎn)染時(shí)的劑量與轉(zhuǎn)染成功率、心功能變化之間的關(guān)系。
　　 方法：ISO法建立心衰動(dòng)物模型，即采用腹腔注射IS03mg/kg，緩慢注射，注意回抽，避免入血管或膀胱，每天一次，連續(xù)三天；對(duì)照組同法僅注

3、射等量生理鹽水。同時(shí)以大鼠腦皮質(zhì)的cDNA作為模板擴(kuò)增目的基因βARK1的序列，并確定βARKct的序列（βARKct為βARK1的羧基末端181aa的氨基酸），再構(gòu)建攜帶有βARKct基因表達(dá)質(zhì)粒，并制備成濃度為1ug/ul的注射劑型。
　　 建模5周后通過尾靜脈注射兩種劑量βARKct質(zhì)粒(0.3mg及0.6mg)對(duì)心衰大鼠進(jìn)行基因轉(zhuǎn)染。轉(zhuǎn)染1周后，用Doppler超聲心動(dòng)圖檢測(cè)大鼠心功能的各項(xiàng)參數(shù)，了解各組大鼠心功能變化情

4、況。并取其心臟組織，用熒光定量PCR及Western-blot檢測(cè)βARKct及βARK1基因的表達(dá)情況。
　　 結(jié)果：
　　 1）使用ISO制備心衰大鼠模型的存活率與其余制備心梗后心衰模型的存活率相近，5周后存活率為53.3％；在第二次行超聲心動(dòng)圖檢測(cè)時(shí)死亡2只，總存活率為48.9%。
　　 2)心衰大鼠心肌βARK1的表達(dá)水平較正常大鼠高，大劑量βARKct質(zhì)?？沙晒D(zhuǎn)染心衰大鼠心肌，但使用尾靜脈注射的方法轉(zhuǎn)

5、染率低；轉(zhuǎn)染成功大鼠的心肌βARK1水平較心衰組明顯下降。
　　 3)Doppler超聲心動(dòng)圖示心衰大鼠射血分?jǐn)?shù)及心輸出量均較對(duì)照組明顯下降。βARKct轉(zhuǎn)染后心衰大鼠心功能有所好轉(zhuǎn)，但射血分?jǐn)?shù)及心輸出量仍低于對(duì)照組。
　　 結(jié)論：應(yīng)用異丙腎上腺素可制備有效、可靠的心衰動(dòng)物模型，制備方法簡(jiǎn)便、無創(chuàng)。且本實(shí)驗(yàn)明確了該種制備方式的ISO使用劑量。通過尾靜脈注射的方式，可使質(zhì)粒攜帶βARKct成功轉(zhuǎn)染入大鼠心肌組織，轉(zhuǎn)染率為2