豬成體神經(jīng)干細胞分離、培養(yǎng)的研究.pdf

1、神經(jīng)干細胞用于神經(jīng)學臨床修復和基礎(chǔ)理論研究的前提是首先完成神經(jīng)干細胞的體外分離、培養(yǎng)、純化并大量擴增。鼠、人中都已成功分離出神經(jīng)干細胞并已嘗試用于動物神經(jīng)系統(tǒng)損傷等疾病的治療,盡管在鼠和人上的研究很多,相對于鼠神經(jīng)干細胞在神經(jīng)學臨床應(yīng)用上的局限和人神經(jīng)干細胞在材料來源上的不便,豬作為神經(jīng)干細胞臨床應(yīng)用和基礎(chǔ)研究的模式動物有很大的潛力。成體神經(jīng)干細胞在細胞替代療法的研究和應(yīng)用中具有廣闊的前景。成體神經(jīng)干細胞移植不僅可以避免應(yīng)用胚胎神經(jīng)干細

2、胞進行細胞替代治療所帶來的倫理問題,而且還可解決由異體或異種移植而導致的免疫排斥問題,使臨床應(yīng)用成為可能。目前,豬成體神經(jīng)干細胞系尚未被建立起來。
　　 本研究旨在探索如何從成豬腦組織中分離培養(yǎng)神經(jīng)干細胞,觀察神經(jīng)干細胞生長特性和體外增殖的特點。主要的實驗方法和實驗結(jié)果如下:
　　 第一部分:選取適用于人或/和鼠的4種培養(yǎng)體系篩選適用于豬的成體神經(jīng)干細胞的培養(yǎng)條件。結(jié)果表明無血清的懸浮或貼壁培養(yǎng)條件不適用于原代分離豬成體

3、神經(jīng)干細胞,只有完全培養(yǎng)液中含有血清的DMEM/F12+10％FBS+20ng/mlbFGF+20ng/mlhEGF+103U/mlLIF培養(yǎng)體系支持豬成體神經(jīng)干細胞的存活和增殖。
　　 第二部分:選取3月齡成豬腦室下區(qū)(SVZ)、海馬齒狀回顆粒細胞下區(qū)(SGZ)、嘴側(cè)遷移通路(RMS)、海馬角(HH)4個腦區(qū)分離培養(yǎng)成體神經(jīng)干細胞,檢測可以分離出豬成體神經(jīng)干細胞的部位。結(jié)果表明4個區(qū)域均含有成體神經(jīng)干細胞,可進行原代分離,但無