極端嗜熱古菌的DNA復(fù)制起始蛋白與DNA聚合酶相互作用研究及古菌ORF組克隆文庫(kù)的構(gòu)建.pdf

1、分類號(hào):華中農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文極端嗜熱古菌的DNA復(fù)制起始蛋白與DNA聚合酶相互作用研究及古菌F組克隆文庫(kù)的構(gòu)建TheInteractionBe伽eenDNARePlicationInitiatorsandDNAPolymeraseintheHyPerthermoPhilicArehaeonandtheConstruetionofArehaealORFeomeCloningLibrary研究生:張璐指導(dǎo)教師:何正國(guó)教授專業(yè):微生物學(xué)獲

2、得學(xué)位名稱:理學(xué)碩士研究方向:分子微生物學(xué)獲得學(xué)位時(shí)間:2009年6月華中農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院二00九年六月華中農(nóng)業(yè)大學(xué)2009屆碩士學(xué)位論文2.1.6緩沖液及試劑的配置.....................................................................一182.2方法……:……182.2.1PcR擴(kuò)增反應(yīng)....................................

3、..............................................……182.2.2分子生物學(xué)基本操作方法...................................................................……192.2.3蛋白的表達(dá)和純化.................................……192.2.4蛋白樣品的透析.....................

4、...............……，......……202.2.5蛋白樣品的濃度測(cè)定...........................................................................……202.2.6互作蛋白的細(xì)菌雙雜交點(diǎn)板驗(yàn)證和篩選...........................................……212.2.7Pull一dow可W己sternblot.....

5、....................................................................……222.2.8DNA底物的同位素標(biāo)記......................................................................……232.2.9凝膠電泳遷移率實(shí)驗(yàn)(EMSA)......................................

6、..................……242.2.10DNA底物的切割聚合反應(yīng)及尿素變性丙烯酞胺凝膠電泳檢測(cè)...……243結(jié)果與分析........................................................................................................……263.1極端嗜熱古菌OrclCdc6與DNA聚合酶PolBI相互作用……263.1.1相關(guān)

7、基因的克隆和載體的構(gòu)建...........................................................……263.1.2細(xì)菌雙雜交鑒定SsoCde6與SSoPolBI的相互作用.........................……273.1.3Pull一down瓜esternblot鑒定SsoCde6與SsoPolBI相互作用..........……293.1.4SsoPolBI對(duì)DNA底物同時(shí)有切

8、割和聚合的活性............................……313.1.5SsoCdc6對(duì)SsoPolBI與DNA底物結(jié)合的影響................................……323.1.6三個(gè)SsoCdc6相互調(diào)控SsoPolBI的聚合酶活性............................……333.1.7三個(gè)SsoCdc6相互調(diào)控SsoPolBI的核酸酶活性.................

9、...........……343.1.8SsoCde6一3與PolBle467的相互作用增強(qiáng)PolBlc467的DNA聚合活性........................................................................................................................……353.1.9刁、結(jié).........................

10、..............................................................................……373.2極端嗜熱古菌ORF組克隆文庫(kù)的構(gòu)建……383.2.1StoORF組基因的PCR擴(kuò)增...............................................................……383.2.2StoORF組克隆文庫(kù)的構(gòu)建........

11、........................................................……383.2.3StoDNA復(fù)制互作蛋白初步篩選.......................................................……403.2.4stoDNA復(fù)制互作蛋白初步篩選信息...............................................……403.2.5小