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1、1988年,Randall K.Saiki等[1,2]從水生棲熱菌(Thermus aquatics)中分離純化到了Taq DNA聚合酶,之后它廣泛應(yīng)用于PCR技術(shù)。TaqDNA聚合酶在95℃的條件下仍然有較高的活性,與其高同源性的大腸桿菌的DNA聚合酶則不具備高耐熱特性。這提示Taq DNA聚合酶具有耐熱標(biāo)記。本實驗,用質(zhì)粒pET-32a亞克隆并表達了Taq DNA聚合酶的多個區(qū)域,測定并分析了其耐熱性,獲得了耐熱區(qū)段H(399 bp
2、)。以H作標(biāo)記,嵌合表達非耐熱蛋白青海湖裸鯉IGF-Ⅱ(insulin-likegrowth factor Ⅱ)。結(jié)果表明,Taq DNA聚合酶的H區(qū)段,是一個高效的耐熱標(biāo)簽,能夠荷載1:1大小的非耐熱蛋白。利用該耐熱標(biāo)簽,85℃熱處理一小時得到高純度(>90％)的嵌合蛋白。
本實驗,用熱純化方法、親和層析法所得嵌合蛋白、及非H區(qū)段標(biāo)記的6xHis標(biāo)記蛋白K50(青海湖裸鯉IGF-Ⅱ的N端1-17氨基酸),分別免疫小鼠,發(fā)
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