eEF2K抑制劑的高通量藥物篩選模型的建立及應(yīng)用.pdf

1、真核生物延伸因子2激酶（eukaryotic elongation factor2 kinase，eEF2K）是由人類基因組eEF2K基因編碼的一個(gè)激酶，是一個(gè)高度保守的激酶，與典型的蛋白激酶在序列上同源性小，它歸屬于一個(gè)名叫"α-激酶"的非典型蛋白激酶小家族。研究顯示，eEF2K在一定的代謝壓力條件下能磷酸化并抑制真核生物延伸因子2（eukaryotic elongation factor2, eEF2）的功能，進(jìn)而抑制細(xì)胞中蛋白質(zhì)合

2、成過(guò)程中多肽鏈的延伸，使細(xì)胞中能量和氨基酸的消耗減少，幫助細(xì)胞度過(guò)營(yíng)養(yǎng)缺乏等不利條件。在很多癌細(xì)胞中eEF2K都有很高的活性。同時(shí)eEF2K的活性依賴于鈣離子和鈣調(diào)蛋白，它還有細(xì)胞的保護(hù)作用使之成為癌癥等疾病藥物治療的潛在靶點(diǎn)。本文旨在運(yùn)用高通量藥物篩選的方法來(lái)發(fā)現(xiàn)eEF2K的小分子抑制劑及其藥用前景。
　　在文中我們建立并優(yōu)化了一個(gè)靶向 eEF2K小分子抑制劑的高通量篩選方法。我們選用DMSO作為陰性對(duì)照，化合物A484954作

3、為陽(yáng)性對(duì)照，檢測(cè)最終反應(yīng)體系中的冷光值來(lái)反應(yīng)化合物抑制率。如果化合物能抑制反應(yīng)體系中eEF2K的活性，則與陽(yáng)性對(duì)照化合物反應(yīng)孔的冷光值相比，其最終檢測(cè)到的冷光值會(huì)降低。由此計(jì)算我們篩選過(guò)程中化合物的抑制率。最終我們對(duì)56000個(gè)小分子化合物進(jìn)行了大規(guī)模的隨機(jī)篩選，得到了9個(gè)具有劑量依賴性反應(yīng)的活性化合物，選出了5個(gè) IC50值小于50μM的化合物進(jìn)行了體外細(xì)胞水平的功能性驗(yàn)證，進(jìn)一步的研究正在進(jìn)行中。
　　我們的該項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)為靶向