單克隆免疫金標(biāo)試紙應(yīng)用于血液中藥物篩選的可靠性研究.pdf

1、目的：
　　1．通過空白添加、動物實(shí)驗(yàn)，探索單克隆試紙對血液中苯二氮類；巴比妥類；毒品類等藥（毒）藥物篩選的檢測閾值及LC-MS/MS確認(rèn)方法的研究；
　　2．通過實(shí)際案例驗(yàn)證單克隆試紙用于血液中苯二氮類；巴比妥類；毒品類等藥(毒)物篩選的可靠性。
　　方法：
　　1．血液用單克隆免疫金標(biāo)試紙檢測前的處理方法的研究
　　通過血液空白添加實(shí)驗(yàn)，分析了不同pH值緩沖液條件、不同離心轉(zhuǎn)速以及不同溫度下對血液前處理

2、的影響，得到血液中不同藥物的檢測閾值。
　　2．動物實(shí)驗(yàn)，建立血液篩選的檢測閾值及檢驗(yàn)方法的研究
　　稱重，按大鼠的LD50給動物灌胃，在動物血液藥物濃度達(dá)到最大值時解剖取血液，按照第二部分的血液前處理，使用單克隆免疫金標(biāo)試紙檢測血液藥物濃度，結(jié)果呈陽性，則減少1/2灌胃劑量，直至單克隆免疫金標(biāo)試紙呈陰性。這時，陰性結(jié)果的前一次陽性灌胃劑量就是現(xiàn)有單克隆免疫金標(biāo)試紙檢測所能達(dá)到的最低血液藥物濃度。
　　取1mL的動物血

3、液，加9mL乙酸乙酯，振蕩，超聲5min，離心，取上清液于蒸發(fā)皿中，60℃水浴揮干，加1mL的乙腈復(fù)溶，有機(jī)膜過濾，LC-MS/MS檢測分析，得到血液藥物濃度。
　　3．通過實(shí)際案例驗(yàn)證單克隆免疫金標(biāo)試紙應(yīng)用于血液中藥物篩選的可靠性研究
　　實(shí)際案例的血液經(jīng)過上述的前處理，使用單克隆免疫金標(biāo)試紙檢測和LC-MS/MS檢測驗(yàn)證，得出結(jié)果。
　　結(jié)果：
　　1.使用單克隆免疫金標(biāo)試紙對血液進(jìn)行藥（毒）物篩選時，有必要

4、向血液中加入磷酸鹽緩沖液，這樣能得到較好的檢測結(jié)果。另外，V（血液）:V（磷酸鹽緩沖液）=1:1進(jìn)行等量添加，效果最好。
　　2.使用Sigma3-30K高速臺式冷凍離心機(jī)在12000轉(zhuǎn)、4℃條件下離心處理得到的檢測限最低，檢測效果最好，在條件允許時最好在篩選時選用高速冷凍離心機(jī)離心，能夠獲得最佳結(jié)果。但是這種離心機(jī)成本高、普及率低，因此，一般使用低速離心機(jī)也是可以的。
　　3.磷酸鹽緩沖液的pH值對各類藥物檢測閾值的影響不

5、一致，其中對氯硝安定和氯胺酮的影響較大。
　　4.實(shí)際案例。2012-2013年的38個實(shí)際案例的LC-MS/MS檢驗(yàn)結(jié)果與用單克隆免疫金標(biāo)試紙檢測結(jié)果相比較，其中的89.47％結(jié)果一致。
　　結(jié)論：
　　1、用于尿液篩選的單克隆免疫金標(biāo)試紙?jiān)趹?yīng)用于血液檢材的篩選時差別不大。
　　2、使用磷酸鹽緩沖液稀釋血液，用高速冷凍離心機(jī)離心，取上清液用于單克隆免疫金標(biāo)試紙篩選血液能夠獲得較好的結(jié)果。
　　3、根據(jù)空白

6、實(shí)驗(yàn)結(jié)果，在使用單克隆免疫金標(biāo)試紙篩選血液中苯二氮類藥物時，應(yīng)注意分別使用pH6-8及pH11兩種緩沖液分別稀釋血液后進(jìn)行篩選，以免漏掉氯硝安定這種需要在堿性條件下才能用單克隆免疫金標(biāo)試紙較好篩選出的藥物。
　　4、使用單克隆免疫金標(biāo)試紙篩選血液中巴比妥類藥物時，使用pH6-8的緩沖液稀釋血液可以滿足檢測需要。
　　5、在使用單克隆免疫金標(biāo)試紙篩選血液中的毒品時，嗎啡類、苯丙胺類使用緩沖液pH6-8，均可滿足檢測要求，但氯胺