鱉甲抗肝纖維化的藥效物質(zhì)及作用機(jī)理研究.pdf

1、鱉甲為藥食兩用傳統(tǒng)中藥，來源于鱉科動(dòng)物鱉(Trionyx sinensisWiegmann)的背甲，具有滋陰潛陽，軟堅(jiān)散結(jié)，退熱除蒸的功效；主治陰虛發(fā)熱，癥瘕，虛風(fēng)內(nèi)動(dòng)等病癥?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，鱉甲提取物顯示了較強(qiáng)的抗肝纖維化作用；據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，以鱉甲為君藥的復(fù)方制劑治療肝纖維化疾患，臨床療效良好。
　　 為了詮釋鱉甲抗肝纖維化的物質(zhì)基礎(chǔ)，本論文在中醫(yī)藥理論指導(dǎo)下，通過多學(xué)科交叉的研究方法，采用超聲提取方法和膜透析分離技術(shù)將鱉甲

2、提取物分為不同分子量范圍的物質(zhì)部位，通過其對(duì)肝星狀細(xì)胞增殖的影響及其對(duì)肝星狀細(xì)胞活化、膠原合成的影響等活性篩選方法，確定了分子量小于6000的鱉甲提取物為抗肝纖維化有效物質(zhì)部位。采用現(xiàn)代色譜分離技術(shù)，通過葡聚糖凝膠Sephadex G-25將鱉甲有效物質(zhì)部位分離為8個(gè)分子量段的肽類物質(zhì)組分(Bj1-Bj8)，藥理篩選得到3個(gè)分子量段肽類物質(zhì)組分具有抗肝纖維化活性(Bj4、Bj6、Bj7)；選擇活性較強(qiáng)的Bj6分子量段進(jìn)一步通過葡聚糖凝膠

3、Sephadex G-15將Bj6分離為16個(gè)肽類物質(zhì)小組分，結(jié)合四甲基偶氮唑鹽微量酶反應(yīng)比色法(MTT比色法)和酶聯(lián)免疫吸附劑測定(ELISA)活性篩選，確定了3個(gè)活性較強(qiáng)的肽類物質(zhì)小組分(Bj6-11、Bj6-12、Bj6-13)；采用制備高效液相色譜分離方法，從這三個(gè)活性較強(qiáng)的肽類物質(zhì)小組分中分離得到9個(gè)肽類成分，藥理篩選表明成分2和成分4具有較強(qiáng)抗肝纖維化作用。
　　 采用4700串聯(lián)飛行時(shí)間質(zhì)譜儀[4700 Prote

4、omics Analyzer(TOF/TOFTM)(Applied Biosystems，USA)]，對(duì)兩種肽類成分進(jìn)行結(jié)構(gòu)分析，測定結(jié)果為：①成分2：分子量為1040.57，氨基酸排序?yàn)閃 L Y P GN T S C(Trp-Leu-Try-Pro-Glv-Asn-Thr-Ser-Cys)；②成分4：分子量為583.299，氨基酸排序?yàn)閅 S G A W(Try-Ser-Gly-Ala-Trp)；經(jīng)NCBI檢索，以上兩個(gè)肽類化合物均