節(jié)球藻毒素(Nodularin,NOD)在鯽魚(Carassius auratus)體內的動態(tài)分布和毒理學研究.pdf

1、節(jié)球藻毒素(NOD)是由泡沫節(jié)球藻(Nodularia spumigena)通過不同分子量的多酶復合物合成并分泌產生的一種環(huán)狀五肽藍藻肝毒素，可對人類、動物、植物和真核微生物產生不利影響。
　　采用反相高效液相色譜分離配置紫外檢測器檢測，初步建立了一種鯽魚肌肉、血漿、肝胰臟和腎臟組織中NOD含量的檢測方法。將勻漿或剪碎后的鯽魚組織用90％甲醇水溶液超聲提取，離心，離心后取上清液加正己烷去脂，離心后棄上層正己烷相，下清液于40℃下氮

2、吹接近吹干，用純甲醇溶解并稀釋至甲醇含量約10%，CNW Bond C18小柱凈化除雜，洗脫液于40℃下氮吹吹干，純甲醇溶解，溶液利用0.45μm的有機微孔濾膜進行過濾，取濾液20μL，238nm檢測波長進行 RP-HPLC檢測。結果表明：NOD在肌肉和血漿組織中的檢出限分別為11.30μg/kg和24.00μg/kg。肌肉、肝胰臟及腎臟中NOD為0.05~5.00 mg/kg，血漿中為0.05~5.00mg/L時，色譜峰峰面積與濃度呈

3、良好的線性相關(R2>0.99)。各組織中NOD的平均回收率均在(87.93±14.38)%～(98.77±11.56)%，平均批內RSD為(1.12±0.99)%～(3.50±1.88)%。該檢驗方法可應用于鯽魚體內NOD的動態(tài)分布以及殘留檢測，為其他水產品中NOD含量的檢測以及水產品質量的安全控制提供了有效的工具。
　　以0.25mg/kg和0.10mg/kg的給藥劑量進行單次腹腔注射給藥，研究了NOD在鯽魚體內的動態(tài)分布。研

4、究發(fā)現：兩種給藥劑量下，肝胰臟中NOD的含量變化范圍分別為0.600~4.029mg/kg和0.229~0.753mg/kg；腎臟中NOD的含量變化范圍分別為0.138~1.193mg/kg和0.160~0.725mg/kg；血漿中NOD的含量變化范圍分別為0.118~0.406mg/kg和0.035~0.079mg/kg；肌肉中NOD的含量變化分別為0.035~0.074mg/kg和0.032~0.050mg/kg。NOD在鯽魚四種組

5、織中均有殘留蓄積，且肝胰臟和腎臟組織中NOD的含量在所取時間點均高于初始注射劑量，四種組織對 NOD蓄積能力的大小為肝胰臟>腎臟>血漿>肌肉。因此可得，鯽魚肝胰臟和腎臟為NOD的主要蓄積庫，這為進一步探究NOD在其他淡水雜食性魚類體內的動態(tài)分布奠定了基礎。
　　設計了A(空白對照)、B(甲醇對照)、C(0.05mg/kg)、D(0.10mg/kg)、E(0.25mg/kg)5個實驗組，研究了NOD對鯽魚血細胞參數的影響，其中C、D

6、、E三個實驗組均采用單次腹腔注射給藥，B組注射純甲醇，A組不作任何處理作為空白對照，所有注射體積均按照鯽魚的實際體重進行。研究發(fā)現：NOD對總白細胞(WBC)數目的影響不大，淋巴細胞(Lymph)數目以及單核細胞(Mon)數目有所增加，中性粒細胞(Gran)數目有所降低。淋巴細胞為魚類主要的免疫細胞，單核細胞在魚類的免疫功能中起到傳遞抗原的作用，產生這一現象的原因可能是NOD激活了鯽魚體內的特異性免疫系統(tǒng)使得魚體內的免疫細胞增加。紅細胞

7、(RBC)數目、血紅蛋白(HGB)含量以及紅細胞壓積(HCT)為紅細胞參數的3個重要指標，其他指標如平均紅細胞體積(MCV)、平均紅細胞血紅蛋白含量(MCH)、平均紅細胞血紅蛋白濃度(MCHC)和紅細胞分布寬度變異系數(RDW)均與其相關。結果表明，總紅細胞數目、血紅蛋白含量在短時間內有所降低，可能原因是NOD引起魚類正常出血性貧血或NOD引起魚體內組織器官出血，引發(fā)魚體內的組織器官損傷。
　　以鯽魚(Carassius aura

8、tus)為實驗對象，研究了NOD對鯽魚肝胰臟生理生化的影響，設定實驗組分別為A(空白對照)、B(甲醇對照)、C(0.05mg/kg)、D(0.10mg/kg)、E(0.25mg/kg)。其中C、D、E三個實驗組均采用單次腹腔注射給藥，B組注射純甲醇，A組不作任何處理作為空白對照，所有注射體積均按照鯽魚的實際體重進行。研究發(fā)現，NOD對鯽魚肝胰臟CAT活力的影響，C、D、E三個劑量組中CAT均受到了誘導，其中C組CAT活力在第3h、24h

9、和192h極顯著高于對照組，第0.5h、12h顯著高于對照組；D組中CAT活力在第3h、6h和24h極顯著高于對照組，第0.5h和192h顯著高于對照組，E組中CAT活力在第24h和48h極顯著高于對照組，第0.5h和1h顯著高于對照組。結果表明，在NOD的脅迫下，鯽魚機體內產生了過量的活性氧自由基。NOD對鯽魚肝胰臟總超氧化物歧化酶(T-SOD)活性無明顯的影響。鯽魚肝胰臟GPX在低劑量組和中劑量組中均受到誘導，而在高劑量組中先受到誘

10、導而后受到抑制，且抑制作用較為明顯，產生這一現象的可能原因是高劑量組NOD在一定程度上對鯽魚機體產生了一定的氧化損傷，使得機體的抗氧化能力降低。還原型谷胱甘肽(GSH)作為GPX的底物，低劑量組和高劑量組中GSH含量均低于對照組，而中劑量組中呈現先降低后升高的趨勢，可能原因是在NOD注射一定時間之后，鯽魚機體對NOD有解毒作用，而高劑量組中GSH含量保持在較低水平表明鯽魚機體內氧化損傷增加，抗氧化能力降低。低、中、高三個劑量組中丙二醛(