SD大鼠脊髓損傷后微環(huán)境的模擬實驗研究（骨鞘相關(guān)抑制因子的表達(dá)）.pdf

1、目的:(1)觀察SD(Sprague-Dawley)大鼠在不同致傷勢能的Allen's模型和脊髓全切模型的微環(huán)境中不同時間點的髓鞘相關(guān)抑制因子的表達(dá)。(2)探討SD大鼠脊髓損傷(spinal cord injury，SCI)后的脊髓提取液模擬髓鞘相關(guān)抑制因子對軸突生長抑制微環(huán)境的最佳時間點。方法:(1)選擇125只成年雌性健康SD大鼠，隨機分為A組（假手術(shù)組，25只）;B組(20g×5cm，25只);C組(20g×10cm，25只);D

2、組（20g×15cm，25只）;E組（脊髓全切組，25只）。(2)在制模成功后第1d、5d、7d、14d、28dBBB后肢運動功能評分、MEP電生理監(jiān)測、病理切片鑒定、觀察各組大鼠脊髓損傷程度;Western Blot印跡分析、RT-PCR檢測髓鞘相關(guān)抑制因子(Nogo-A、MAG、OMgp)的表達(dá)。(3)本次實驗數(shù)據(jù)的計量資料均用(x)±s表示，采用SPSS19.0軟件包處理，各個組間比較使用方差分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義

3、。
　　結(jié)果:(1)整個實驗中SD大鼠死亡24只，其中B組2只，死亡率為8.33％;C組死亡4只，死亡率為16.67％;D組8只，其中尿路感染死亡2只，術(shù)后出現(xiàn)血尿1只，死亡率為33.33％;E組，死亡10只，其中尿路感染死亡4只，出現(xiàn)血尿3只，死亡率為41.67％，E組的死亡率和并發(fā)癥最高。(2)造模后，每個組的BBB評分均降低，A組SD大鼠僅表現(xiàn)為行走輕度障礙和肢體協(xié)調(diào)性欠佳，第5天后恢復(fù)正常;D、E兩組大鼠損傷后雙后肢全癱，

4、所有手術(shù)組SD大鼠均隨著時間延長BBB評分逐漸增高。1d，5d，7d，14d，28d各組BBB評分，A組:19.89±0.57分，20.51±0.49分，21分，21分，21分;B組:2.94±0.57分，5.88±0.84分，8.46±0.76分，14.12±0.35分，15.34±0.76分;C組:1.72±2.12分，4.28±1.46分，6.02±1.38分，10.33±1.40分，11.28±3.42分;D組:0.00±0.0

5、0分，0.84±0.75分，1.25±0.78分，3.50±1.51分，4.31±2.32分;E組:0.00±0.00分，0.89±0.39分，1.35±0.97分，2.45±0.75分，4.42±1.93分。B組、C、組、D組、E組與假手術(shù)A組在對應(yīng)時間點之間比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，D組和E組在對應(yīng)時間點之間比較差異無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05）。(3)組織學(xué)檢查:A組早期出現(xiàn)神經(jīng)元水腫，其它時間點細(xì)胞數(shù)量無異常改變。B

6、、C、D、E組在傷后24小時病灶處出現(xiàn)炎性細(xì)胞浸潤，神經(jīng)元細(xì)胞腫脹明顯，隨著時間推移，神經(jīng)細(xì)胞減少;傷后28天發(fā)現(xiàn)大量星形膠質(zhì)細(xì)胞增生，瘢痕及脊髓空洞形成，D、E組明顯重于B、C組。(4)傷后各組的1d、5d、7d、14d、28dMEP潛伏期，A組:2.24±0.15ms，2.28±0.14ms，2.35±0.07ms,2.33±0.12ms,2.41±0.04ms;B組:3.83±0.16ms,3.51±0.15ms,2.33±0.1

7、4ms，2.28±0.16ms，2.50±0.12ms;C組:4.32±0.11ms，4.13±0.29ms，3.63±0.28ms，3.49±0.17ms，3.35±0.05ms;D組:4.74±0.22ms，4.44±0.06ms，4.48±0.25ms，4.61±0.11ms，4.72±0.51ms;E組:4.75±0.32ms，4.41±0.07ms，4.53±0.01ms，4.71±0.09ms,4.69±0.34ms。B組、

8、C、組、D組、E組與假手術(shù)A組在對應(yīng)時間點間比較，p＜0.05;各組內(nèi)后一時間點與其前一相鄰時間點比較，p＜0.05; D組和E組在對應(yīng)時間點之間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(p＞0.05)。(5)Western blot檢測，1d、5d、7d、14d、28dMAG相對量表達(dá)，A組:0.324±0.084，0.334±0.054，0.413±0.032，0.389±0.032，0.404±0.043;B組:0.413±0.092,0.494±0

9、.132,0.599±0.134,0.494±0.133,0.396±0.098;C組:0.436±0.123,0.496±0.136,0.602±0.145,0.598±0.034,0.401±0.143; D組:0.514±0.137,0.594±0.184,0.798±0.139,0.710±0.032,0.405±0.039;E組:0.503±0.157,0.589±0.096,0.801±0.147,0.765±0.098,0

10、.423±0.119。1d、5d、7d、14d、28d Nogo-A相對量表達(dá)，A組:0.334±0.076,0.367±0.045,0.423±0.031,0.387±0.041,0.463±0.037。B組:0.401±0.184,0.501±0.134,0.593±0.118,0.398±0.123,0.384±0.124;C組:0.424±0.163,0.474±0.125,0.674±0.136,0.584±0.032,0.4

11、14±0.025;D組:0.513±0.141,0.574±0.164,0.794±0.129,0.714±0.105,0.494±0.098;E組:0.515±0.098,0.585±0.174,0.807±0.105,0.736±0.038,0.485±0.032。1d、5d、7d、14d、28d OMgp相對量表達(dá)， A組:0.303±0.084,0.312±0.105,0.323±0.132,0.337±0.021,0.298±

12、0.134。B組:0.473±0.132,0.678±0.142,0.584±0.104,0.403±0.098,0.394±0.132;C組:0.485±0.174,0.732±0.103,0.641±0.098,0.492±0.132,0.401±0.132;D組:0.532±0.134,0.814±0.093,0.703±0.032,0.501±0.134,0.432±0.125; E組:0.541±0.133,0.796±0.1

13、13,0.705±0.141,0.534±0.132,0.395±0.023。檢測結(jié)果顯示B、 C、 D、E組脊髓損傷后1天即可見Nogo-A、 MAG、 OMgp的表達(dá)，Nogo-A的表達(dá)強度在脊髓損傷后第5d開始上升，呈遞增趨勢，第7d表達(dá)最高，14d后逐步降低，第28天逐漸恢復(fù)到假手術(shù)組水平，以D、E兩組表達(dá)最高;MAG在7d后達(dá)到高峰，到28d后逐漸恢復(fù)到假手術(shù)組水平。OMgp脊髓損傷后1天即可見到髓鞘中OMgP的表達(dá)，第5天達(dá)

14、到高峰，第28d后逐漸恢復(fù)至假手術(shù)組水平。(6) RT-PCR檢測:Nogo-AmRNA在1d、5d、7d、14d、28d相對量表達(dá)，A組:1.0054±0.0042,1.0049±0.0038,1.0019±0.0040,1.0023±0.0037,1.0040±0.0028。B組:0.8600±0.0034,1.2557±0.0029,1.3097±0.0042,1.2708±0.0028,0.8693±0.0018;C組:0.89

15、58±0.0013,1.3177±0.0016,1.4817±0.0021,1.3351±0.0019,0.8961±0.0011;D組:0.9451±0.0010,1.4253±0.0012,1.5452±0.0023,1.3933±0.0019,0.9394±0.0023;E組:1.0567±0.0021,1.5925±0.0023,1.7734±0.0017,1.6650±0.0025,1.0063±0.0026。 MAGmRNA

16、在1d、5d、7d、14d、28d相對量表達(dá)為，A組:1.0045±0.0015,1.0001±0.0017,1.0047±0.0021,1.0017±0.0023,1.0019±0.0024。B組:0.9651±0.0019,1.0455±0.0023,1.0903±0.0018,1.0143±0.0026,0.9986±0.0025。C組:1.0233±0.0017,1.1732±0.0019,1.2075±0.0018,1.184

17、3±0.0023,1.0360±0.0027。D組:1.0537±0.0019,1.2395±0.0025,1.4250±0.0028,1.243±0.0019,1.0744±0.0026。E組:1.0780±0.0016,1.3170±0.0024,1.5045±0.0028,1.3239±0.0029,1.1280±0.0034。 OmgP mRNA在1d、5d、7d、14d、28d相對量表達(dá)為，A組:0.5001±0.0018,0

18、.5093±0.0021,0.5016±0.0020,0.5012±0.0018,0.5013±0.0017。B組:0.5335±0.0021,0.5653±0.0018,0.5638±0.0021,0.5400±0.0023,0.5324±0.0024;C組:0.5919±0.0018,0.7059±0.0021,0.6425±0.0020,0.6104±0.0029,0.5882±0.0028;D組:0.6488±0.0018,0.

19、8545±0.0030,0.8085±0.0019,0.6705±0.0034,0.6340±0.0019;E組:0.6787±0.0015,0.9030±0.0021,0.8675±0.0026,0.7269±0.0023,0.6661±0.0024。手術(shù)組B、C、D、E組Nogo-A、 MAG在第5天的相對表達(dá)量與本組其他時間點比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05),D組與E組同一時間點的相對表達(dá)量比較無差異(P＞0.05)。 OM

20、gp在第7天的相對表達(dá)量與本組其他時間點比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，D組與E組同一時間點的相對表達(dá)量比較無差異(P＞0.05)。Nogo-A、MAG、OMgp在SCI后的病灶中心明顯上調(diào)，第1天可檢測到表達(dá)，Nogo-A和MAG在第7天達(dá)到峰值，OMgp在第5天后達(dá)到高峰，28天后逐漸恢復(fù)到假手術(shù)組水平，以D組、E組兩組表達(dá)最高。
　　結(jié)論:(1)致傷勢能為20g×5cm，20g×10cm，20g×15cm，可模擬SD