SD大鼠脊髓損傷后早期注射BMSCs對小膠質(zhì)細(xì)胞影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：⑴分離、培養(yǎng)及鑒定SD大鼠BMSCs；⑵構(gòu)建SD大鼠T10脊髓鉗夾損傷模型，研究早期靜脈注射BMSCs對SCI后小膠質(zhì)細(xì)胞活性和炎性反應(yīng)影響，從而為闡明BMSCs調(diào)節(jié)SCI后脊髓內(nèi)免疫反應(yīng)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法：⑴采用差速貼壁法從SD大鼠股骨及脛骨分離培養(yǎng)BMSCs。通過向成骨樣細(xì)胞、成脂肪樣細(xì)胞及成神經(jīng)樣細(xì)胞分化及流式細(xì)胞儀檢測表面標(biāo)志物CD29、CD34、CD45和CD90的表達(dá)來鑒定BMSCs。⑵應(yīng)用鉗夾法制備S

2、D大鼠T10脊髓損傷模型，隨機(jī)分組建立假手術(shù)組、對照組及處理組，傷后5小時(shí)內(nèi)對處理組尾靜脈注射BMSCs懸液，對照組及假手術(shù)組尾靜脈注射無血清L-DMEM液。應(yīng)用免疫組織化學(xué)法，觀察各組術(shù)后1d、3d、7d、14 d、21d的脊髓損傷區(qū)OX-42標(biāo)記的小膠質(zhì)細(xì)胞形態(tài)、分布及數(shù)量變化；觀察各組術(shù)后1d、3d、7d、14 d、21d相應(yīng)時(shí)間SD大鼠后肢神經(jīng)功能評(píng)分（Basso，Beattie，Bresnahan locomotor rati

3、ng scale，BBB）；利用ELISA法觀察各組術(shù)后6h、12h、24h、72h脊傷髓損傷處IL-1β含量變化；
　　 結(jié)果：⑴分離出的BMSCs體外培養(yǎng)呈克隆式生長，增值速度快，經(jīng)成骨、成脂肪及成神誘導(dǎo)培養(yǎng)后出現(xiàn)相應(yīng)的誘導(dǎo)細(xì)胞。流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果顯示，體外培養(yǎng)BMSCs表達(dá)間充質(zhì)干細(xì)胞表面標(biāo)志CD29、CD90，不表達(dá)造血干細(xì)胞表明標(biāo)志CD34、CD45。⑵對T10脊髓鉗夾后，SD大鼠出現(xiàn)典型的截癱癥狀。對照組和處理組各時(shí)

4、段（1d、3d、7d、14d、21d）OX-42平均陽性細(xì)胞數(shù)均顯著高于假手術(shù)組（P<0.05）。與對照組相比較，處理組各時(shí)段（1d、3d、7d、14d、21d）OX-42平均陽性細(xì)胞數(shù)顯著降低（P<0.05）。損傷組和治療組BBB平均評(píng)分值在損傷后1d、3d、7d、14d、21d均小于假手術(shù)組（P<0.05）。治療組與損傷組BBB平均評(píng)分比較， 1d、3d、7d無差異（P>0.05），14d、21d高于損傷組（P<0.05）。損傷組I