消癥方治療子宮腺肌病的細(xì)胞學(xué)機(jī)制研究.pdf

1、目的:
　　本研究將采用膠原酶消化法處理子宮腺肌病的在位子宮內(nèi)膜組織，并運(yùn)用體外細(xì)胞分離培養(yǎng)技術(shù)，原代分離培養(yǎng)腺肌病在位子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞。采用含藥血清處理細(xì)胞的方法，通過(guò)Transwell細(xì)胞遷移試驗(yàn)、Matrigel細(xì)胞侵襲試驗(yàn)及FN細(xì)胞黏附試驗(yàn)觀察消癥方對(duì)子宮腺肌病的在位子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞的遷移、侵襲和黏附能力的影響，從而探討消癥方治療子宮腺肌病可能的細(xì)胞學(xué)機(jī)制。同時(shí)為消癥方臨床應(yīng)用于治療子宮腺肌病提供科學(xué)證據(jù)和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)，也為中

2、醫(yī)消癥化瘀法治療子宮腺肌病賦予新的內(nèi)涵，并從細(xì)胞運(yùn)動(dòng)和黏附功能的改變上認(rèn)識(shí)子宮腺肌病發(fā)生發(fā)展的可能機(jī)制，為該疾病的保守治療提供新的思路。
　　方法:
　　1.本研究將選擇2014年1月至2015年5月在廣東省中醫(yī)院婦一科要求行全子宮切除術(shù)治療，且術(shù)后病理確診為子宮腺肌病的患者8例，在無(wú)菌條件下取其子宮內(nèi)膜組織用于體外分離培養(yǎng)。運(yùn)用膠原酶Ⅰ對(duì)上述所得子宮內(nèi)膜組織進(jìn)行消化處理，后經(jīng)過(guò)濾、離心，原代分離培養(yǎng)出腺肌病在位子宮內(nèi)膜間質(zhì)

3、細(xì)胞，并采用免疫細(xì)胞化學(xué)的方法對(duì)細(xì)胞進(jìn)行鑒定。
　　2.本研究實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選擇SPF級(jí)SD雌性未孕大鼠15只，均購(gòu)自廣東省中醫(yī)藥科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。將其隨機(jī)分為3組，分別為消癥方組、孕三烯酮組及對(duì)照組。計(jì)算各藥物臨床等效劑量并分別使用消癥方懸液、孕三烯酮懸液和生理鹽水對(duì)上述三組大鼠進(jìn)行灌胃處理后，經(jīng)10％水合氯醛行腹腔注射麻醉后，行腹主動(dòng)脈采血，通過(guò)高速離心，分離并收集血清，從而分別制備出消癥方含藥血清、孕三烯酮含藥血清及對(duì)照血清。<

4、br>　　3.分別將消癥方含藥血清、孕三烯酮含藥血清和對(duì)照血清與高糖DMEM培養(yǎng)液配制成血清濃度為5％、10％、20％的細(xì)胞培養(yǎng)液，分別作用于上述分離培養(yǎng)所得的子宮腺肌病在位子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞24h后，通過(guò)Transwell細(xì)胞遷移試驗(yàn)，Matrigel細(xì)胞侵襲試驗(yàn)及FN細(xì)胞黏附試驗(yàn)比較經(jīng)上述各組細(xì)胞培養(yǎng)液作用后的腺肌病在位子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞其遷移、侵襲和黏附等細(xì)胞學(xué)行為的變化。
　　成果:
　　1.本研究通過(guò)膠原酶Ⅰ對(duì)子宮腺肌

5、病在位子宮內(nèi)膜組織進(jìn)行消化，并通過(guò)過(guò)濾、離心等步驟，成功分離培養(yǎng)出7例腺肌病在位子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞，并使用間質(zhì)細(xì)胞特異性指標(biāo)波形蛋白(vimentin)，對(duì)原代分離培養(yǎng)后第4代細(xì)胞進(jìn)行免疫細(xì)胞化學(xué)鑒定，證實(shí)為子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞。
　　2.本研究運(yùn)用體外實(shí)驗(yàn)證明，消癥方含藥血清影響原代培養(yǎng)的腺肌病在位子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞的遷移、侵襲和黏附能力:5％、10％、20％三個(gè)濃度的對(duì)照血清對(duì)腺肌病在位子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞的遷移、侵襲和黏附能力的影響，差

6、異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。與相同血清濃度的對(duì)照血清組相比，消癥方含藥血清組及孕三烯酮含藥血清組其各組遷移、侵襲及黏附的細(xì)胞數(shù)均有不同程度的減少，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05)。而與相同血清濃度的孕三烯酮含藥血清組相比較，血清濃度為20％的消癥方含藥血清能更顯著地抑制腺肌病在位子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞的遷移、侵襲及黏附能力，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　1.消癥方含藥血清能有效地抑制腺肌病在位子宮內(nèi)膜