EDN1及EPO基因與有氧運(yùn)動(dòng)能力相關(guān)分子標(biāo)記的生物功能研究.pdf

1、本研究通過構(gòu)建真核表達(dá)系統(tǒng)及雙熒光素酶報(bào)告基因系統(tǒng)，分別對(duì)EDN1 SNP rs5370與EPO SNP rs551238多態(tài)位點(diǎn)的生物功能進(jìn)行分析，擬闡明該多態(tài)位點(diǎn)的作用機(jī)制，為此兩個(gè)多態(tài)位點(diǎn)作為遺傳分子標(biāo)記提供科學(xué)依據(jù)。
　　研究一：全基因組合成EDN1 GG基因型cDNA序列，并連接至pcDNA3.1(+)，構(gòu)建GG型重組質(zhì)粒。基因定點(diǎn)突變方法構(gòu)建TT型重組質(zhì)粒。轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)分組：無質(zhì)粒對(duì)照組（B組）；空質(zhì)粒對(duì)照組（C組）；GG

2、基因型組（G組）；TT基因型組（T組）。共計(jì)4組，轉(zhuǎn)染至293T細(xì)胞，轉(zhuǎn)染細(xì)胞培養(yǎng)48h收取細(xì)胞培養(yǎng)上清液，放射免疫方法檢測(cè)上清液ET含量。結(jié)果：重組質(zhì)粒測(cè)序比對(duì)結(jié)果顯示，GG、TT基因型序列與EDN1基因cDNA序列符合率100％，重組質(zhì)粒構(gòu)建成功。細(xì)胞培養(yǎng)上清液ET含量測(cè)定結(jié)果顯示，重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組的ET-1濃度均高于對(duì)照組。GG基因型組ET-1濃度最高，且與空白組相比，有顯著性差異（P<0.05）。TT基因型組ET-1濃度低于GG基

3、因型組，TT基因型組與各組間相比，無顯著性差異。結(jié)論：EDN1 SNP rs5370對(duì)ET-1表達(dá)不明顯。
　　研究二：全基因組合成包含rs551238多態(tài)位點(diǎn)的增強(qiáng)子-啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄調(diào)控元件，并將該重組調(diào)控元件連接至pGL3-basic質(zhì)粒，構(gòu)建相應(yīng)的熒光素酶報(bào)告基因載體。以pGL3-basic、pGL3-Promter、pGL3-EPO-G、pGL3-EPO-T共計(jì)4組分別轉(zhuǎn)染至293T細(xì)胞與HepG2細(xì)胞。采用Dual-Luci