糖原合成酶激酶-3參與調(diào)節(jié)由氯化鈉和尿素組成的高滲溶液誘導(dǎo)的尿素轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白A1在細(xì)胞膜上的聚集.pdf

1、目的：探討急性高滲刺激對尿素轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白A1（urea transporter A1，UT-A1）分布狀態(tài)的影響以及糖原合成酶激酶-3（GSK3）在這一過程中的作用。
　　方法：應(yīng)用UTA1-GFP-pCMV6質(zhì)粒穩(wěn)定轉(zhuǎn)染小鼠內(nèi)髓集合管上皮細(xì)胞(mouse inner medullary collecting duct, mIMCD3)，構(gòu)建UTA1-mIMCD3穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株。分別用氯化鈉、尿素、氯化鈉加尿素組成不同滲透壓的高滲溶液以及

2、GSK3的激活劑和抑制劑刺激UTA1-mIMCD3細(xì)胞，采用免疫熒光技術(shù)檢測UTA1在細(xì)胞中的分布變化，激光共聚焦技術(shù)檢測UTA1與高爾基體、Rab5的關(guān)系，免疫印跡檢測UTA1的表達(dá)、GSK3的活性狀態(tài)，生物素標(biāo)記膜蛋白以及免疫共沉淀技術(shù)檢測UTA1在細(xì)胞膜上的表達(dá)。
　　結(jié)果：1）氯化鈉以及氯化鈉加尿素高滲處理1h后UTA1在細(xì)胞內(nèi)的分布由片狀變?yōu)辄c(diǎn)狀，UTA1與Rab5解離、從高爾基體中釋放，在細(xì)胞膜上表達(dá)增加，細(xì)胞內(nèi)磷酸化