結(jié)痂酊有效組分提取純化工藝及其對(duì)大鼠燙傷作用研究.pdf

1、目的:
　　 對(duì)結(jié)痂酊組方中藥進(jìn)行生藥學(xué)研究，建立結(jié)痂酊有效組分的含量測(cè)定方法，確定最佳的提取和純化的工藝，考察其體外抗菌、抗氧化活性，觀察其對(duì)燙傷大鼠的治療作用，并初步探討其作用機(jī)制。
　　 方法:
　　 1.通過(guò)性狀及顯微鑒別對(duì)結(jié)痂酊中兒茶、黃芩、黃柏進(jìn)行鑒定。
　　 2.采用HPLC法測(cè)定結(jié)痂酊有效組分的含量，正交設(shè)計(jì)法優(yōu)化提取工藝;大孔樹(shù)脂吸附法確定最佳純化工藝。
　　 3.采用試管二倍稀

2、釋法研究結(jié)痂酊有效組分的抗菌活性，通過(guò)測(cè)定電導(dǎo)率、掃描電鏡、透射電鏡的方法初步研究其作用機(jī)制。
　　 4.采用Folin法測(cè)定結(jié)痂酊有效組分的總酚含量，采用FRAP法、鐵氰化鉀還原法、DPPH法、ABTS法、羥自由基法和超氧陰離子自由基清除法測(cè)定結(jié)痂酊有效組分的抗氧化能力。
　　 5.建立大鼠燙傷模型，通過(guò)形態(tài)學(xué)、病理學(xué)觀察結(jié)痂酊有效組分對(duì)燙傷大鼠的治愈情況，通過(guò)檢測(cè)大鼠血清中SOD、MDA、NO以及TNF-a、IL-1

3、β、IL-6水平，進(jìn)一步探討結(jié)痂酊有效組分治療燙傷的作用機(jī)制。
　　 結(jié)果:
　　 1.經(jīng)過(guò)大連醫(yī)科大學(xué)刁云鵬副教授鑒定，兒茶、黃芩、黃柏均是正品。
　　 2.正交設(shè)計(jì)確定的最佳提取工藝為30℃，70％的乙醇提取3次，每次提取30min;建立的反相高效液相色譜法系統(tǒng)穩(wěn)定性良好，而且兒茶素濃度在100-800μg/mL、黃芩苷15-120μg/mL、小檗堿在7-56μg/mL范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。選擇HP20型

4、號(hào)大孔吸附樹(shù)脂用不同濃度乙醇進(jìn)行梯度洗脫，10％乙醇洗脫出來(lái)的兒茶素的含量較高，30％乙醇洗脫的成分中黃芩苷的含量較高，50％乙醇洗脫的成分中小檗堿的含量較高。
　　 3.體外抗菌實(shí)驗(yàn)，結(jié)痂酊的10％乙醇提取物抗菌活性較高，MBC為0.5mg/mL，在此濃度下，18h時(shí)可將細(xì)菌全部殺死，通過(guò)測(cè)定電導(dǎo)率、透射電鏡和掃描電鏡觀察其超微結(jié)構(gòu)，發(fā)現(xiàn)其抗菌作用與破壞細(xì)菌細(xì)胞壁，影響細(xì)胞膜的通透性密切相關(guān)。
　　 4.結(jié)痂酊提取物純

5、化產(chǎn)物總酚含量:10％乙醇純化物＞30％乙醇純化物＞50％乙醇純化物;抗氧化實(shí)驗(yàn)中，10％乙醇純化物的抗氧化能力最強(qiáng)，結(jié)痂酊有效組分的抗氧化能力隨著總酚含量的增多而逐漸增大。
　　 5.大鼠體內(nèi)燙傷實(shí)驗(yàn)，結(jié)痂酊有效組分治療作用顯著，與對(duì)照組比較，給藥組創(chuàng)面面積明顯減小，愈合時(shí)間明顯縮短。病理學(xué)觀察，結(jié)痂酊有效組分能夠有效抑制炎癥因子的生長(zhǎng)，促進(jìn)成纖維細(xì)胞、肉芽組織、毛囊等再生。結(jié)痂酊有效組分能夠升高燙傷大鼠血清中SOD活性，降低

6、MDA、NO含量，減輕脂質(zhì)過(guò)氧化損傷，明顯提高大鼠體內(nèi)抗氧化的能力;同時(shí)顯著降低燙傷血清中炎癥介質(zhì)TNF-α、IL-1β、IL-6的含量，減輕組織的水腫程度，對(duì)創(chuàng)面起到保護(hù)作用。
　　 結(jié)論:
　　 本課題對(duì)結(jié)痂酊方劑中的中藥飲片進(jìn)行鑒定;確立結(jié)痂酊有效組分的最佳提取工藝;優(yōu)選了最有效的純化方式;建立了準(zhǔn)確，可靠，重現(xiàn)性好的HPLC法，用來(lái)測(cè)定有效成分的含量;結(jié)痂酊有效組分具有較好的體外抗菌、抗氧化活性;結(jié)痂酊有效組分對(duì)