血清kappa-lambda雜合抗體在自身免疫性胰腺炎診斷中的意義及其形成機(jī)制的研究.pdf

1、自身免疫性胰腺炎(AIP)是一種IgG4相關(guān)性疾病，往往伴有血清IgG4水平增高和胰腺外器官損傷，占所有慢性胰腺疾病的2％左右。由于胰頭腫大和膽道后壁擴(kuò)張，臨床上多表現(xiàn)為梗阻性黃疸。血清IgG4是目前唯一公認(rèn)的診斷自身免疫性胰腺炎的血清學(xué)標(biāo)志物。當(dāng)前，自身免疫性胰腺炎的發(fā)病原因及IgG4在疾病中的作用仍不清楚。
　　精典抗體理論認(rèn)為:一個(gè)成熟的漿細(xì)胞能夠產(chǎn)生一種由兩條相同的重鏈和兩條相同的輕鏈（κ鏈或λ鏈）組成的完全對(duì)稱性的抗體分

2、子。在過(guò)去的10年中，越來(lái)越多的研究證明，IgG4是一種動(dòng)態(tài)的抗體分子，能夠通過(guò)“半分子”（通過(guò)二硫鍵連結(jié)的一條重輕鏈對(duì)）交換的作用形成具有兩種抗原結(jié)合位點(diǎn)的非對(duì)稱性抗體。最近的一項(xiàng)研究表明，正常人血清中含有大量的IgG4亞型構(gòu)成的κ/λ雜合抗體，這種分子由兩條IgG4類型的重鏈和一條κ輕鏈和一條λ輕鏈組成。因?yàn)樽陨砻庖咝砸认傺淄ǔ０橛醒錓gG4濃度的升高，所以我們嘗試研究雜合抗體對(duì)于AIP的診斷以及與胰腺癌的鑒別診斷價(jià)值。
　

3、　我們建立了一種檢測(cè)人血清雜合抗體的雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)方法。首先，利用抗人λ輕鏈的單克隆抗體包被ELISA板，再利用過(guò)氧化物酶(HRP)標(biāo)記的抗人κ輕鏈的抗體作為檢測(cè)抗體，摸索各反應(yīng)條件使之達(dá)到最優(yōu)化并進(jìn)行檢測(cè)體系的驗(yàn)證。我們檢測(cè)了總共338例血清，包括61例AIP、74例胰腺癌、50例急性胰腺炎、40例慢性胰腺炎、15例混合性胰腺疾病和98例胰腺正常的疾病對(duì)照，研究表明，雜合抗體在AIP、胰腺癌、急性胰腺炎、慢性

4、胰腺炎、混合性胰腺疾病和胰腺正常的對(duì)照組的中位數(shù)和范圍分別為6.75AU/mL(1.53-55.5AU/mL)，2.06AU/mL(0.26-4.97AU/mL),2.06AU/mL(0.86-4.94AU/mL),2.04AU/mL(0.93-6.1AU/mL),1.61AU/mL(0.94-4.87AU/mL)和2.05AU/mL(0.42-7.2 AU/mL)。 AIP中的雜合抗體水平相比于非AIP組明顯增高(p＜0.001)，而

5、在非AIP對(duì)照組之間沒(méi)有顯著性差異(p=0.66)。為了評(píng)估血清雜合抗體對(duì)于AIP的診斷價(jià)值，我們建立了不同的臨界值來(lái)評(píng)價(jià)其敏感度和特異性，從受試者工作曲線(ROC)可知，最佳的臨界值為4.04AU/mL，對(duì)應(yīng)的敏感度、特異性、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值和陰性預(yù)測(cè)值分別為80.3％，91％，66.2％，95.5％，曲線下面積為0.93(p＜0.001)，雜合抗體鑒別診斷AIP與胰腺癌的敏感度和特異性分別為80.3％和87.8％，與單獨(dú)的血清IgG4相比

6、，雜合抗體聯(lián)合血清IgG4能夠在特異性變化不大的情況下(85.9％vs87.7％)明顯提高診斷實(shí)驗(yàn)的敏感度(90.2％vs78.7％)。
　　接下來(lái)，我們研究了AIP病人雜合抗體的生成機(jī)制。利用尺寸排阻色譜、親合柱純化和非還原聚丙烯酰胺凝膠電泳證實(shí)，絕大部分雜合抗體以免疫球蛋白單體的形式存在。血清雜合抗體與IgG4濃度明顯正相關(guān)(r=0.772，p＜0.001)。通過(guò)一種新的磁珠親合分離技術(shù)證實(shí)，絕大部分雜合抗體屬于IgG4亞型，