白梨品種抗腐爛病相關(guān)基因克隆與抗病機(jī)理研究.pdf

1、我國(guó)是梨生產(chǎn)的大國(guó)，但是梨樹一直遭受各種的威脅，損失嚴(yán)重，其中梨樹腐爛病為一種弱寄生真菌引起的主要危害梨樹主干、主枝和側(cè)枝的枝干型病害。目前防治方法主要是化學(xué)防治，但根本途徑還在于克隆相關(guān)抗病基因，培育抗病品種。
　　本研究擬以篩選獲得的抗病白梨品種‘秋白’和感病品種‘茌梨’為研究材料，從分子水平上研究梨樹抗腐爛病的機(jī)制。利用腐爛病病菌接種后 Illumina HiseqTM2000測(cè)序，并通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量（qRT-PCR）技術(shù)驗(yàn)

2、證轉(zhuǎn)錄組的結(jié)果。用篩選的抗病性差異顯著的基因進(jìn)行全長(zhǎng)克隆。用過(guò)氧化氫（H2O2）試劑盒測(cè)定不同處理后‘秋白’和‘茌梨’枝干內(nèi)源的H2O2的水平。采用了高效液相色譜（HPLC）對(duì)‘秋白’和‘茌梨’枝干部位酚類物質(zhì)的各組分進(jìn)行定性和定量分析。采用酶聯(lián)免疫分析法（ELISA），秋白和茌梨枝干中內(nèi)源SA和JA的含量。其結(jié)果如下：
　?。?）通過(guò)離體休眠期枝條燙傷法接種白梨品種，發(fā)現(xiàn)‘秋白’抗病和‘茌梨’易感；
　?。?）作Illum

3、ina HiseqTM2000測(cè)序和qRT-PCR，篩選了一批抗病候選基因并挑選了其中2個(gè)進(jìn)行全長(zhǎng)克隆和qRT-PCR分析；
　?。?）對(duì)酚類物質(zhì)測(cè)定，發(fā)現(xiàn)酚類物質(zhì)含量最多的是熊果苷、綠原酸和表兒茶素。用不同的外源處理后發(fā)現(xiàn)：‘茌梨’在外源SA處理后其內(nèi)部的熊果苷、綠原酸和表兒茶素的變化呈下降趨勢(shì)；外源JA處理后其內(nèi)部的熊果苷和綠原酸含量變化都是先下降后上升；接種的腐爛病病菌后其內(nèi)部的熊果苷和表兒茶素含量一直呈現(xiàn)上升趨勢(shì)?！锇住?/p>

4、其熊果苷含量變化一致，呈先下降后上升趨勢(shì)；綠原酸在接種腐爛病和JA處理后都呈現(xiàn)先下降后上升；表兒茶素在不同處理后呈現(xiàn)不同的變化趨勢(shì)。
　　（4）內(nèi)源H2O2測(cè)定發(fā)現(xiàn)：外源的SA處理后兩個(gè)品種都呈現(xiàn)H2O2水平的上升，而腐爛病病菌接種和外源的JA處理‘秋白’和‘茌梨’內(nèi)源的H2O2水平變化趨勢(shì)相反。
　?。?）用外源的JA、SA處理，結(jié)果顯示易感品種‘茌梨’對(duì)于外源的刺激，都會(huì)引起內(nèi)源JA含量的上升和SA含量的下降，且二者表現(xiàn)