大豆疫霉菌無毒基因的克隆及馬鈴薯抗病品種紫花白抗晚疫病機(jī)制的研究.pdf

1、卵菌綱是近些年來由鞭毛菌亞門中新分出的一大類，能夠侵染很多重要的糧食作物、林業(yè)、觀賞植物進(jìn)而對自然生態(tài)系統(tǒng)造成嚴(yán)重影響。大豆疫霉病和馬鈴薯晚疫病是由卵菌綱真菌 Phytophthora sojae和Phytophthora infestans分別侵染大豆和馬鈴薯后發(fā)生的兩種主要病害。目前，防治這兩種病害最為有效、經(jīng)濟(jì)以及環(huán)保的方式依然是培育優(yōu)良的抗病品種。因此，利用分子生物學(xué)技術(shù)克隆和鑒定致病疫霉的無毒基因、解析馬鈴薯抗晚疫病機(jī)制可以為

2、大豆和馬鈴薯的抗病育種奠定基礎(chǔ)。
　　本論文中采用了篩選候選 Avh基因方法克隆了 P.sojae無毒基因 Avr1d。利用遺傳作圖分析確定了Avr1d與Avh6共分離。在含有抗性基因Rps1d的大豆葉片中進(jìn)行功能驗(yàn)證，證實(shí)了Avh6就是Avr1d?；虮葘Y(jié)果得知Avr1d基因在對Rps1d有毒的生理小種的基因組中是缺失的。在對11個(gè)大豆疫霉生理小種進(jìn)行基因測序分析得知，Avr1d有2個(gè)allele。在Rps1d大豆植株中瞬時(shí)表

3、達(dá)全長野生型Avr1d蛋白和全長RFLR突變體蛋白（RFLR突變?yōu)锳AAA）的結(jié)果表明，RFLR保守區(qū)域不能介導(dǎo)Avr1d分泌到寄主細(xì)胞的過程中。脂類結(jié)合實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明effector區(qū)域的正電荷氨基酸決定Avr1d蛋白與寄主細(xì)胞膜上的PtdIns(4)P結(jié)合。
　　論文中利用分離群體分組分析法結(jié)合新一代測序技術(shù)找到了與無毒基因 Avr1c緊密連鎖的3個(gè)單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)。利用MapMaker軟件和生物信息學(xué)比對軟件，最后確定 Av

4、h275c在遺傳群體中的基因型與 Avr1c的表型共分離?；驑屗矔r(shí)表達(dá)實(shí)驗(yàn)也同時(shí)證明 Avh275c就是 Avr1c。對15個(gè)無毒生理小種測序分析得知，Avr1c有3個(gè) allele。Avr1c與Avr1a在大豆疫霉基因組上的位置非常相近。這兩個(gè)基因在氨基酸序列N端有高度的一致性，差異在C端顯著較大。
　　通過對馬鈴薯抗感品種紫花白和夏坡蒂在接種晚疫病菌前后活性氧產(chǎn)生的速度和活性氧量的積累以及抗病信號路徑中重要蛋白在轉(zhuǎn)錄水平的變