馬鈴薯抗晚疫病基因的等位基因發(fā)掘與轉(zhuǎn)化.pdf

1、學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明I I I I t l l l l I I II I H I l l l l l l lI I I lY 2 6 6 3 5 5 6本人聲明所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說明并表示謝意。研究生簽名．剞辨 帆渺年7 月) ／日學(xué)位論文

2、版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位} 侖文作者完全了解學(xué)校有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，有權(quán)保留并向國家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)學(xué)?？梢詫W(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。( 保密的學(xué)位論文在解密后適用本授權(quán)書)研究生簽名：子懈新簽字：玲歹布。，匕 } ，1 x時(shí)間：Ⅺ- 年’7 月≯日時(shí)間：矽，p 年7 月) 日青島農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文

3、摘要摘要馬鈴薯( S o l a n a u m t u b e r o s u m ．L ) 是世界第四大糧食作物，在世界食物安全中具有十分重要的作用。由致病疫霉菌( P h y t o p h t h o r ai n f e s t a n s ) 引起的晚疫病是馬鈴薯第一大病害，危害嚴(yán)重，難以防治。研究發(fā)現(xiàn)，四倍體馬鈴薯基因型M a R l l 對馬鈴薯晚疫病菌具有小種?；剐?，其抗病基因來源于六倍體馬鈴薯野生種＆d e m i

4、 s s u m ?？雇硪卟』騌 l l 位于馬鈴薯第X I 號(hào)染色體末端的船位點(diǎn)上，通過對已克隆R 3 位點(diǎn)的多個(gè)抗病基因( 如R 3 a 和R 3 b ) 的分析發(fā)現(xiàn)，R 3 位點(diǎn)上的抗病基因均具有共同的分子結(jié)構(gòu)( C C - N B S ．L R R ) 。因此，本研究旨在利用比較基因組學(xué)和抗病基因類似物法，發(fā)掘x I號(hào)染色體短臂末端抗晚疫病主效位點(diǎn)( M a j o r l a t e b l i g h t r e s i

5、s t a n c ec o m p l e x ，M L B ) 上的抗晚疫病基因或其類似物，并進(jìn)行基因轉(zhuǎn)化驗(yàn)證功能。主要研究結(jié)果有：( 1 ) 以含有抗晚疫病基因R l l 的M a R l 1 為材料，根據(jù)R 3 位點(diǎn)上抗病基因保守結(jié)構(gòu)域L R R 和N B S 設(shè)計(jì)引物，以M a R l l 的基因組D N A 為模板進(jìn)行P C R 擴(kuò)增，獲得了具有完整開放閱讀框的序列，利用生物信息學(xué)軟件對所得序列進(jìn)行同源性比較和系統(tǒng)進(jìn)化分析，

6、篩選得到6 個(gè)候選抗病基因類似物：A 2 、B 2 、B 3 、D 2 、F 3 、F 4 。( 2 ) 以p B I N P L U S 為骨架載體，構(gòu)建了6 個(gè)候選抗病基因類似物的植物表達(dá)載體p B I N P L U S —A 2 、p B I N P L U S —B 2 、p B I N P L U S —B 3 、p B I N P L U S —D 2 、p B I N P L U S - F 3 、p B I N P L

7、 U S ．F 4 ，利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)入感病品種四倍體馬鈴薯D e s i r e e 中，分別獲得了具有K a n 抗性的再生苗3 、2 、0 、4 、5 、3 株，并對部分轉(zhuǎn)基因植株進(jìn)行了P C R 檢測，結(jié)果表明抗病基因類似物A 2 、D 2 、F 3 已導(dǎo)入D e s i r e e 中。其它植株正在檢測中，本實(shí)驗(yàn)室后期將對轉(zhuǎn)基因植株接種晚疫病菌，進(jìn)行抗病性鑒定以驗(yàn)證候選抗病基因的功能。關(guān)鍵詞：馬鈴薯；晚疫?。豢共』蝾愃莆?；