血根堿通過激活活性氧產(chǎn)生誘導(dǎo)頭頸癌細(xì)胞凋亡的機(jī)制研究.pdf

1、本文采用整合DEVD位點的螢火蟲熒光素酶報告基因CyclicFluc和海腎熒光素酶報告基因PRLTK的雙色熒光報告基因系統(tǒng)，對血根堿誘導(dǎo)的頭頸癌細(xì)胞凋亡的機(jī)制進(jìn)行了一系列的研究。在14種天然化合物藥物分別與22B細(xì)胞作用后對其進(jìn)行了雙色熒光檢測，推測血根堿可以誘導(dǎo)頭頸癌細(xì)胞凋亡。進(jìn)而通過對caspase3的蛋白進(jìn)行了western blot實驗確定了血根堿可使Caspase3蛋白表達(dá)增強(qiáng)；用不同濃度的血根堿對22B細(xì)胞進(jìn)行了CCK-8細(xì)

2、胞增殖實驗，確定血根堿濃度的升高對22B細(xì)胞增殖的影響；用流式細(xì)胞儀檢測不同濃度的血根堿作用于22B細(xì)胞后細(xì)胞凋亡的數(shù)目與血根堿濃度的關(guān)系。并研究了caspase3活性與血根堿作用濃度的關(guān)系；判斷血根堿誘導(dǎo)22B細(xì)胞凋亡過程的時間依賴性和藥物濃度依賴性；此外，研究了ROS與細(xì)胞凋亡過程中的作用，以及得出NF-кB細(xì)胞通路和JNK細(xì)胞通路是本凋亡過程中起調(diào)控作用的細(xì)胞通路。最后建立了裸鼠腫瘤模型，研究Cyclic Fluc在體的激活和表達(dá)