系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者外周血單個核細(xì)胞PRKCB基因mRNA表達(dá)的研究.pdf

1、研究背景：系統(tǒng)性紅斑狼瘡（Systemic Lupus Erythematosus，SLE）是一種累及全身多臟器的系統(tǒng)性自身免疫病，好發(fā)于育齡期女性，嚴(yán)重危害患者的身心健康并給患者家庭和社會造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。盡管其病因及發(fā)病機(jī)理至今尚未完全闡明，但目前普遍認(rèn)為該病是由多種因素（遺傳因素、環(huán)境因素、精神心理因素等）交互作用引起的，大量的流行病學(xué)調(diào)查研究表明遺傳因素在SLE發(fā)生、發(fā)展中占有重要地位。
　　隨著全基因組關(guān)聯(lián)分析（Ge

2、nome-wide association study，GWAS）和大樣本、多種族候選基因研究的不斷開展，目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)72個易感基因/位點。其中2010年，本課題組盛宇俊等以SLE既往GWAS數(shù)據(jù)庫(1,047個病例和1,205對照）為基礎(chǔ)，從30個基因座中選擇了38個非 MHC的 SNP位點，將這些SNP位點在另外兩個漢族人病例對照組（3,152個病例和7,050個對照）中進(jìn)行基因分型，發(fā)現(xiàn)新的易感位點PRKCB和8P11.2。其中，

3、PRKCB（全稱為protein kinase C beta，PKCβ）基因的單個核苷酸多態(tài)性（single nucleotide polymorphism， SNP）rs16972959與 SLE易感性顯著相關(guān)（OR=0.81,95％CI:0.76-0.87, P=1.35×10-9）。PKCβ在B細(xì)胞和肥大細(xì)胞中高度表達(dá)，在人類免疫性疾病中占有重要地位，已被報道參與許多不同的細(xì)胞功能。如PKCβ可以激活處于靜息狀態(tài)的NF-κB，通過

4、磷酸化與NF-κB二聚體結(jié)合的的IKB，使得IKB被泛素化，在蛋白酶作用下被水解，釋放與之結(jié)合的NF-κB。NF-κB從而進(jìn)入細(xì)胞核與PRKCB基因啟動子相結(jié)合，調(diào)節(jié)該基因轉(zhuǎn)錄，基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物參與調(diào)節(jié)B細(xì)胞活化，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，內(nèi)皮細(xì)胞增殖等功能。PKCβ活化異常與糖尿病、自身免疫性疾病（包括SLE）等疾病的發(fā)生與發(fā)展密切相關(guān)。
　　研究目的：探討PRKCB基因在SLE患者和正常對照中mRNA的表達(dá)情況，PRKCB基因mRNA的表達(dá)水

5、平與SLE活動指數(shù)（SLEDAI）、rs16972959基因分型的關(guān)系，探究PRKCB基因與SLE表型之間的關(guān)系，揭示PRKCB基因在SLE發(fā)病中的相關(guān)作用機(jī)制。
　　研究方法：本研究收集60例SLE患者和62例正常對照的血樣和臨床相關(guān)資料。首先從血樣的外周血單個核細(xì)胞（ PBMCs）中提取出 mRNA并且逆轉(zhuǎn)錄為Complementary DNA c(cDNA)，接著利用ABI7900型高通量熒光定量PCR技術(shù)測定外周血單個核細(xì)

6、胞中 PRKCB基因 mRNA的表達(dá)量的情況，再提取血樣 DNA并進(jìn)行濃度標(biāo)準(zhǔn)化，接著通過Sequenom MassArray基因分型技術(shù)對122個樣本的rs16972959位點進(jìn)行處理，最后整合所有實驗數(shù)據(jù)利用SPSS20.0軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。
　　結(jié)果：SLE患者外周血單個核細(xì)胞中 PRKCB基因的 mRNA表達(dá)水平高于正常對照，且兩者之間對比具有顯著差異性（P<0.001）；SLE患者外周血單個核細(xì)胞中PRKCB基因mRN