7株變形桿菌的O抗原基因簇的破譯和特異基因的鑒定.pdf

1、變形桿菌(Proteus)屬于腸桿菌科（Enterobacteriaceae），革蘭氏陰性菌。變形桿菌廣泛存在于自然環(huán)境中及動(dòng)物的腸道中。變形桿菌具有多形性，運(yùn)動(dòng)活潑，有遷徙生長現(xiàn)象。變形桿菌屬于條件致病菌，是導(dǎo)致泌尿系統(tǒng)感染的常見致病菌，也可引起食物中毒。
　　 多數(shù)變形桿菌的O抗原化學(xué)結(jié)構(gòu)已被破譯。變形桿菌O抗原基因簇的研究，對(duì)于解析變形桿菌O抗原多樣性的形成機(jī)制具有重要作用。O抗原特異基因均存在于O抗原基因簇中，基于特異基

2、因的特異分子標(biāo)識(shí)的篩選，為變形桿菌分子分型系統(tǒng)的建立奠定基礎(chǔ)。
　　 本研究利用變形桿菌基因簇兩側(cè)的持家基因上的引物擴(kuò)增7株變形桿菌的O抗原基因簇；用鳥槍法構(gòu)建O抗原基因簇文庫；用ABI3730測(cè)序儀對(duì)插入片斷進(jìn)行測(cè)序；運(yùn)用生物信息學(xué)方法對(duì)序列進(jìn)行拼接，預(yù)測(cè)開放閱讀框，并對(duì)基因功能進(jìn)行分析，進(jìn)一步通過PCR方法鑒定了這些變形桿菌的血清型特異基因及特異引物。
　　 經(jīng)分析發(fā)現(xiàn)，7株變形桿菌的O抗原基因簇均位于cpxA基因和

3、secB基因之間。cpxA到甲基轉(zhuǎn)移酶基因按照5’-3’的方向轉(zhuǎn)錄。其余基因按照3’-5’的方向轉(zhuǎn)錄。變形桿菌O抗原基因簇的平均CG含量較低，在30％～33%之間。變形桿菌O抗原基因簇中的基因與其O抗原結(jié)構(gòu)相對(duì)應(yīng)，并具有多樣性。變形桿菌的O抗原基因簇中均包含ugd、甲基轉(zhuǎn)移酶基因、絲氨酸乙?；D(zhuǎn)移酶基因以及NAD(P)H依賴的甘油-3-磷酸脫氫酶基因。通過實(shí)驗(yàn)鑒定了特異基因wzy，基于該基因的引物經(jīng)驗(yàn)證可作為特異分子標(biāo)識(shí)，為分子分型方法