結(jié)核桿菌inhA基因突變與肺癆康治療耐異煙肼肺結(jié)核分子機(jī)制關(guān)系初探.pdf

1、目的：研究中藥復(fù)方肺癆康治療耐異煙肼肺結(jié)核小鼠的分子機(jī)制，從分子生物學(xué)角度，探討其治療作用與inhA基因突變之間的關(guān)系，為中醫(yī)藥治療耐藥肺結(jié)核提供一些研究思路。
　　方法：本研究先取80只昆明種小鼠，尾靜脈注射法建立耐異煙肼肺結(jié)核動物模型，隨機(jī)分為模型組、異煙肼組、肺癆康組及異煙肼聯(lián)合肺癆康組，分別給予生理鹽水、異煙肼、肺癆康、異煙肼聯(lián)合肺癆康灌胃治療56天；選取20只同種小鼠，尾靜脈注射H37RV標(biāo)準(zhǔn)結(jié)核分枝桿菌菌懸液，建立H3

2、7RV標(biāo)準(zhǔn)菌小鼠模型，以生理鹽水灌胃56天；選取20只同種小鼠，尾靜脈注射生理鹽水作為空白組，以生理鹽水灌胃56天；比較各組小鼠一般體征及治療前后體重變化，56天后取小鼠肺臟組織進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)；肉眼及光鏡下觀察各組小鼠肺臟組織病理變化；利用全基因組重測序技術(shù)對治療后小鼠肺組織中結(jié)核桿菌基因組DNA進(jìn)行重測序，以標(biāo)準(zhǔn)菌株（H37RV）為參考序列，篩選對比分析；采用SPSS21.0統(tǒng)計(jì)軟件對實(shí)驗(yàn)中的計(jì)量、計(jì)數(shù)資料進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，采用bwa(v

3、ersion0.7.8)、samtools、Picard等軟件處理全基因測序后的數(shù)據(jù)并進(jìn)行堿基與基因組表達(dá)結(jié)果的比對。
　　結(jié)果：通過對比治療前后的的小鼠體重變化，各組小鼠治療前體重組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），治療后各自小鼠體重組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），標(biāo)準(zhǔn)菌株組與模型組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），異煙肼組、肺癆康組、聯(lián)合用藥組與模型組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；肉眼觀察小鼠肺部形態(tài)發(fā)

4、現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)菌株組和模型組肺部形態(tài)有明顯改變，每只小鼠肺組織均有大小不等結(jié)節(jié)，異煙肼組、肺癆康組、聯(lián)合用藥組僅僅有部分小鼠肺臟現(xiàn)有結(jié)節(jié)，比較各組小鼠結(jié)節(jié)數(shù)差異性，標(biāo)準(zhǔn)菌株與模型組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；異煙肼組與模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；肺癆康組與模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；聯(lián)合用藥組與模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），肺癆康、模型組、聯(lián)合用藥組之間差異性無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；光鏡

5、下觀察治療組肺臟炎癥反應(yīng)較模型組明顯減輕；研究發(fā)現(xiàn)與結(jié)核桿菌耐藥基因inhA基因突變相關(guān)的可能的突變堿基位點(diǎn)有三個(gè)，分別位于基因組的第1673425、1676290、1678706堿基位置，對應(yīng)堿基C、C、A突變?yōu)門、A、C。該位置堿基突變分別位于編碼序列上游、下游、下游，基因組編碼序列的改變分別在777、1279、3695。對比各組堿基位點(diǎn)，標(biāo)準(zhǔn)菌株這三個(gè)位置堿基與參考堿基一致，模型組、肺癆康組、異煙肼組、聯(lián)合組耐異煙肼結(jié)核桿菌與in

6、hA對應(yīng)堿基均有突變，且突變位置、基因組編碼序列、基因一致。
　　結(jié)論：1．肺癆康治療耐異煙肼肺結(jié)核模型小鼠，能顯著改善小鼠的一般體征及組織病變，減輕肺部炎癥反應(yīng)，為臨床應(yīng)用治療耐藥肺結(jié)核提供更多依據(jù)；2．通過全基因測序發(fā)現(xiàn)一些新的與inhA基因突變相關(guān)位點(diǎn)，分別位于編碼序列上游、下游、下游，基因組編碼序列的改變分別在777、1279、3695；3．初步研究發(fā)現(xiàn)肺癆康抗耐異煙肼肺結(jié)核的分子機(jī)制與誘發(fā)inhA基因回復(fù)突變關(guān)系不明顯，