SETDB1在結(jié)直腸癌增殖和凋亡中的作用研究.pdf

1、背景和目的:結(jié)直腸癌是全世界范圍內(nèi)最常見的消化道腫瘤之一，在我國結(jié)直腸癌的發(fā)病率位列消化道腫瘤的第一位，同時隨著近年來膳食結(jié)構(gòu)的改變，結(jié)直腸癌的發(fā)病率仍在不斷上升，且多數(shù)病人發(fā)現(xiàn)時已屬于腫瘤的中晚期階段，因此結(jié)直腸癌已成為嚴(yán)重危害中國人健康的疾病。目前結(jié)直腸癌仍是以手術(shù)切除為主，同時輔以放化療治療，但是其生存率仍然沒有得到明顯提高，因此，研究結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展的分子機制，找到更加有效的分子檢測靶標(biāo)來進(jìn)行結(jié)直腸癌的診斷，并且對腫瘤的轉(zhuǎn)移和

2、復(fù)發(fā)進(jìn)行更準(zhǔn)確的判斷，以此提高結(jié)直腸癌患者的診斷和治療，使其獲得長期術(shù)后生存和較高生活質(zhì)量有著十分重要的意義。
　　SET domain bifurcated1（SETDB1）是一種組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶，其基因長度為50kbp，定位于人1q21.3染色體上，能調(diào)節(jié)組蛋白甲基化，并參與基因沉默和轉(zhuǎn)錄抑制的過程。通過對SETDB1進(jìn)行基因沉默和轉(zhuǎn)錄抑制，認(rèn)為其在疾病的發(fā)病機制中扮演了一個非常重要的角色。
　　在結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展中S

3、ETDB1是否也起到重要的作用，尚不清楚。本課題首先探討了在結(jié)直腸癌患者組織中SETDB1的表達(dá)情況，分析其表達(dá)與相關(guān)臨床病理指標(biāo)的相互關(guān)系；隨后使用 siRNA干擾技術(shù)沉默SETDB1基因的表達(dá)觀察其低表達(dá)對結(jié)直腸癌細(xì)胞增殖凋亡的影響。
　　方法:
　　1、SETDB1在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)及臨床意義
　　利用免疫組化分別檢測SETDB1在70例結(jié)直腸癌組織及癌旁黏膜中的分布及表達(dá)情況，并分析SETDB1表達(dá)與臨床病

4、理特征的相關(guān)性。
　　2、沉默SETDB1后對結(jié)直腸癌細(xì)胞增殖和凋亡能力的影響
　　1）利用Real-Time PCR檢測3種結(jié)直腸癌細(xì)胞株Lovo、HT29、SW480中SETDB1的表達(dá)，篩選出SETDB1mRNA表達(dá)最高的細(xì)胞株對SETDB1基因進(jìn)行沉默干擾。
　　2）使用SiRNA干擾技術(shù)轉(zhuǎn)染SETDB1基因表達(dá)量最高的細(xì)胞株Lovo，運用Real-Time PCR和Western blot檢測轉(zhuǎn)染后的結(jié)直腸癌

5、細(xì)胞株中SETDB1 mRNA及蛋白的表達(dá)情況，檢測其轉(zhuǎn)染效率。
　　3）用CCK8、流式細(xì)胞技術(shù)比較SETDB1基因沉默前后細(xì)胞增殖和凋亡能力的變化；并用Western blot、Real-Time PCR檢測增殖和凋亡相關(guān)基因cyclinD1和Bcl-2、Bax的蛋白及mRNA表達(dá)水平。
　　結(jié)果:
　　1、SETDB1在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)及臨床意義
　　70例結(jié)直腸癌組織免疫組化結(jié)果顯示，SETDB1在結(jié)

6、直腸癌組織中的表達(dá)高于癌旁黏膜組織。統(tǒng)計學(xué)分析發(fā)現(xiàn)，SETDB1的表達(dá)與患者的年齡、性別、浸潤深度、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移無關(guān)（P>0.05），而與腫瘤的分化程度具有顯著性相關(guān)性（P<0.05）。
　　2、SiRNA沉默SETDB1基因表達(dá)對結(jié)直腸癌細(xì)胞增殖和凋亡的影響
　　1）SETDB1基因在Lovo細(xì)胞株中高表達(dá)。
　　2）合成的三條SETDB1 SiRNA干擾片段，其中SETDB1/SiRNA-1/-

7、2兩條轉(zhuǎn)染效率相當(dāng)，且轉(zhuǎn)染效率高于SETDB1/SiRNA-3。
　　3）CCK8實驗結(jié)果顯示：與對照組Lovo/NC相比，沉默SETDB1基因后的結(jié)腸癌細(xì)胞Lovo/SETDB1/SiRNA-1/-2的增殖能力降低。
　　4）流式細(xì)胞技術(shù)實驗結(jié)果顯示：與對照組Lovo/NC相比，SETDB1基因沉默后的結(jié)腸癌細(xì)胞Lovo/SETDB1/SiRNA-1/-2的G1期細(xì)胞比例減少，而G2期和S期細(xì)胞比例增加，發(fā)生G2/M期阻滯