SETDB1在結直腸癌增殖和凋亡中的作用研究.pdf

1、背景和目的:結直腸癌是全世界范圍內(nèi)最常見的消化道腫瘤之一，在我國結直腸癌的發(fā)病率位列消化道腫瘤的第一位，同時隨著近年來膳食結構的改變，結直腸癌的發(fā)病率仍在不斷上升，且多數(shù)病人發(fā)現(xiàn)時已屬于腫瘤的中晚期階段，因此結直腸癌已成為嚴重危害中國人健康的疾病。目前結直腸癌仍是以手術切除為主，同時輔以放化療治療，但是其生存率仍然沒有得到明顯提高，因此，研究結直腸癌的發(fā)生發(fā)展的分子機制，找到更加有效的分子檢測靶標來進行結直腸癌的診斷，并且對腫瘤的轉(zhuǎn)移和

2、復發(fā)進行更準確的判斷，以此提高結直腸癌患者的診斷和治療，使其獲得長期術后生存和較高生活質(zhì)量有著十分重要的意義。
　　SET domain bifurcated1（SETDB1）是一種組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶，其基因長度為50kbp，定位于人1q21.3染色體上，能調(diào)節(jié)組蛋白甲基化，并參與基因沉默和轉(zhuǎn)錄抑制的過程。通過對SETDB1進行基因沉默和轉(zhuǎn)錄抑制，認為其在疾病的發(fā)病機制中扮演了一個非常重要的角色。
　　在結直腸癌的發(fā)生發(fā)展中S

3、ETDB1是否也起到重要的作用，尚不清楚。本課題首先探討了在結直腸癌患者組織中SETDB1的表達情況，分析其表達與相關臨床病理指標的相互關系；隨后使用 siRNA干擾技術沉默SETDB1基因的表達觀察其低表達對結直腸癌細胞增殖凋亡的影響。
　　方法:
　　1、SETDB1在結直腸癌組織中的表達及臨床意義
　　利用免疫組化分別檢測SETDB1在70例結直腸癌組織及癌旁黏膜中的分布及表達情況，并分析SETDB1表達與臨床病

4、理特征的相關性。
　　2、沉默SETDB1后對結直腸癌細胞增殖和凋亡能力的影響
　　1）利用Real-Time PCR檢測3種結直腸癌細胞株Lovo、HT29、SW480中SETDB1的表達，篩選出SETDB1mRNA表達最高的細胞株對SETDB1基因進行沉默干擾。
　　2）使用SiRNA干擾技術轉(zhuǎn)染SETDB1基因表達量最高的細胞株Lovo，運用Real-Time PCR和Western blot檢測轉(zhuǎn)染后的結直腸癌

5、細胞株中SETDB1 mRNA及蛋白的表達情況，檢測其轉(zhuǎn)染效率。
　　3）用CCK8、流式細胞技術比較SETDB1基因沉默前后細胞增殖和凋亡能力的變化；并用Western blot、Real-Time PCR檢測增殖和凋亡相關基因cyclinD1和Bcl-2、Bax的蛋白及mRNA表達水平。
　　結果:
　　1、SETDB1在結直腸癌組織中的表達及臨床意義
　　70例結直腸癌組織免疫組化結果顯示，SETDB1在結

6、直腸癌組織中的表達高于癌旁黏膜組織。統(tǒng)計學分析發(fā)現(xiàn)，SETDB1的表達與患者的年齡、性別、浸潤深度、腫瘤大小、淋巴結轉(zhuǎn)移以及遠處轉(zhuǎn)移無關（P>0.05），而與腫瘤的分化程度具有顯著性相關性（P<0.05）。
　　2、SiRNA沉默SETDB1基因表達對結直腸癌細胞增殖和凋亡的影響
　　1）SETDB1基因在Lovo細胞株中高表達。
　　2）合成的三條SETDB1 SiRNA干擾片段，其中SETDB1/SiRNA-1/-

7、2兩條轉(zhuǎn)染效率相當，且轉(zhuǎn)染效率高于SETDB1/SiRNA-3。
　　3）CCK8實驗結果顯示：與對照組Lovo/NC相比，沉默SETDB1基因后的結腸癌細胞Lovo/SETDB1/SiRNA-1/-2的增殖能力降低。
　　4）流式細胞技術實驗結果顯示：與對照組Lovo/NC相比，SETDB1基因沉默后的結腸癌細胞Lovo/SETDB1/SiRNA-1/-2的G1期細胞比例減少，而G2期和S期細胞比例增加，發(fā)生G2/M期阻滯