福建名優(yōu)菊花工廠化試管育苗關鍵技術研究.pdf

1、本試驗以福建名優(yōu)菊花‘綠江南’、‘白云如羅’兩個品種菊花為材料，進行工廠化育苗關鍵技術研究。試驗首先采用莖段培養(yǎng)建立了‘綠江南’和‘白云如羅’2個菊花品種的高效再生與快繁體系，并同時采用無菌苗莖段建立了薄層培養(yǎng)系統(tǒng)；其后，采用ISSR技術進行試管苗的遺傳穩(wěn)定性分析；最后，分析菊花工廠化育苗經濟效益，提出菊花工廠化育苗模式。主要研究結果如下：
　　1、莖段培養(yǎng)建立福建名優(yōu)菊花再生與快繁體系
　?、倬栈o菌株系的建立。以‘綠江南

2、’、‘白云如羅’帶腋芽莖段為外植體，建立試管苗無菌株系。試驗采用0.1% HgCl2對‘綠江南’菊花莖段進行消毒，比較不同消毒時間對菊花試管苗污染率和成活率的影響。試驗結果表明：‘綠江南’菊花莖段最佳消毒處理為75%酒精消毒30 s后用0.1%HgCl2消毒9 min，污染率為1.1%，成活率達93.3%。
　　②菊花莖段培養(yǎng)。本試驗以生長健壯的‘綠江南’和‘白云如羅’菊花試管苗為材料，采用莖段培養(yǎng)建立再生體系。試驗采用L9（34

3、）正交試驗設計，比較不同濃度的6-BA、NAA以及不同基本培養(yǎng)基（MS、1/2MS、1/4MS）對試管苗增殖的影響。試驗結果表明：‘綠江南’莖段培養(yǎng)的最佳增殖培養(yǎng)基為MS+0.15 mg/L6-BA+0.15mg/L NAA，增殖系數為6.48；‘白云如羅’莖段培養(yǎng)的最佳增殖培養(yǎng)基為MS+0.25 mg/L6-BA+0.25 mg/L NAA，增殖系數5.93。
　?、劬栈ㄉ囵B(yǎng)。以長勢一致的‘綠江南’和‘白云如羅’兩種菊花試管

4、苗剪成1~2 cm左右?guī)~片莖段，接種到生根培養(yǎng)基中，試驗采用 L9（34）正交試驗設計，探討不同基本培養(yǎng)基（MS、1/2MS、1/4MS）和不同濃度 NAA、IBA對菊花試管苗生根的影響。試驗結果表明：‘綠江南’的最佳生根培養(yǎng)基為1/2MS+NAA0.3 mg/L+ IBA0.1 mg/L，生根率91.6%；‘白云如羅’的最佳生根培養(yǎng)基為1/2MS+NAA0.5 mg/L+IBA0.3 mg/L，生根率達100%。
　　④試管苗

5、移栽。以‘白云如羅’菊花試管苗為材料比較不同煉苗時間和基質對試管苗移栽成活率的影響。a)將經過生根的‘白云如羅’菊花試管苗移到自然環(huán)境條件下，比較煉苗1 d、3 d、5 d對移栽成活率的影響。試驗結果表明：煉苗3天后，試管苗的成活率最高，成活率達100%。b)將煉苗3 d后的‘白云如羅’試管苗移栽到6種不同的基質中，比較不同基質對試管苗移栽成活率的影響，試驗結果表明：最適的移栽基質為草炭土：蛭石：園土=1：1：1，移栽成活率為96.7%

6、，且試管苗生長情況良好。
　?、菔┓侍幚韺栈ㄒ圃悦缟L的影響。試驗設計三個處理，比較花多多10號2000、3000、4000倍稀釋液對菊花苗生長的影響，噴施4次后統(tǒng)計材料的生長情況。試驗發(fā)現(xiàn)，用花多多10號2000倍稀釋液進行噴施效果最好，植株葉片面積較大，葉片更多，株高最高。
　　2、福建名優(yōu)菊花薄層培養(yǎng)高效再生與快繁體系的建立
　?、俨煌〔牟课粚Σ欢ㄑ糠只挠绊?。取生長健壯的‘綠江南’和‘白云如羅’菊花試管苗莖

7、段上部、下部和葉柄分別橫切成0.5~1 mm的薄層接種于MS+6-BA2.0 mg/L+NAA0.1 mg/L的培養(yǎng)基中表面，比較不同取材部位對不定芽分化的影響。試驗結果表明：取試管苗上部莖段進行薄層培養(yǎng)分化率最高，‘綠江南’的分化率為92.7%，‘白云如羅’的分化率為38.2%。
　?、诓煌瑵舛萒DZ、6-BA、NAA對菊花薄層培養(yǎng)不定芽分化的影響。a)將‘綠江南’和‘白云如羅’菊花試管苗上部莖段橫切薄層接種于不同濃度的TDZ培

8、養(yǎng)基中。試驗結果表明：兩個品種在TDZ濃度為0.1 mg/L分化率和增殖系數均達到最大值，‘綠江南’的分化率為25.0%，增殖系數0.29；‘白云如羅’的分化率為25%，增殖系數0.30。b)比較不同濃度6-BA對兩個品種菊花試管苗薄層培養(yǎng)分化率和增殖系數的影響。試驗結果發(fā)現(xiàn)：‘綠江南’和‘白云如羅’兩個菊花品種在MS+0.1 mg/L NAA+2 mg/L6-BA培養(yǎng)基中分化率和增殖系數均達到最大值?！G江南’分化率為95.8%，增殖

9、系數6.69；‘白云如羅’分化率40.33%，增殖系數為1.05。c)將兩個品種菊花試管苗在添加不同濃度的NAA培養(yǎng)基中進行薄層培養(yǎng)。探討NAA濃度對薄層培養(yǎng)分化率和增殖系數的影響。試驗結果表明：‘綠江南’在MS+6-BA2.0 mg/L+NAA0.1 mg/L培養(yǎng)基中分化率達到最大值88.0%，增殖系數也達到最大值5.34；NAA濃度為0.1 mg/L‘白云如羅’試管苗分化率和增殖系數均達到最大值，分別為37.8%和1.03，NAA濃

10、度過高或過低，不定芽的分化程度均降低。
　　經過比較分析認為‘綠江南’薄層培養(yǎng)的最佳增殖培養(yǎng)基為MS+2 mg/L6-BA+0.1 mg/L NAA，1個薄層的增殖系數為6.69，1株試管苗可切成40個薄層，其復合增殖系數267.6。‘白云如羅’薄層培養(yǎng)的最佳增殖培養(yǎng)基為MS+2 mg/L6-BA+0.1 mg/L NAA，1個薄層的增殖系數為1.05，1株試管苗可切成40個薄層，其復合增殖系數為42。
　　3、菊花試管苗不

11、同繼代次數遺傳穩(wěn)定性的ISSR分析
　　提取‘綠江南’和‘白云如羅’兩個品種0代、3代、6代、9代、12代、15代的基因組DNA，利用篩選出的12條引物進行ISSR擴增，擴增統(tǒng)計結果：‘綠江南’6個DNA模版利用12條引物共擴增出114個位點，‘白云如羅’6個DNA模版利用12條引物共擴增出104個位點。數據分析表明：兩個品種的前三代試管苗都基本保持穩(wěn)定，經過15次繼代后，變異率分別為7.8%和7.3%。因此‘綠江南’和‘白云如羅

12、’兩個品種的試管苗經過短期的繼代離體培養(yǎng)并不會發(fā)生變異，經過多次繼代后，才會發(fā)生一定變異。在工廠化育苗過程中，講究的是快繁，繼代次數較少，所以本試驗建立的高效、短期穩(wěn)定的再生與快繁體系，適合工廠化育苗的需求，有較好的應用前景。
　　4、菊花工廠化育苗模式與經濟效益分析
　　建立了福建名優(yōu)菊花的工廠化育苗模式并對經濟效益進行分析。本試驗建立的工廠化育苗模式為：將菊花莖段經過0.1%HgCl2消毒9 min后接種于MS培養(yǎng)基中，

13、建立無菌株系成活率93.3%；通過橫切薄層培養(yǎng)進行增殖培養(yǎng)，兩個品種的最佳培養(yǎng)基均為MS+6-BA2.0 mg/L+NAA0.1 mg/L，‘綠江南’1個薄層的增殖系數6.69，1株試管苗可切40個薄層，其復合增殖系數為267.6。每50天繼代一次，一年可繼代7代，以此為參數，離體培養(yǎng)時污染率控制在5%以下，按試管苗理論計算公式計算得‘綠江南’1株試管苗1年可增殖9.9×1016株，‘白云如羅’1個薄層的增殖系數1.05，1株試管苗可切

14、40個薄層，其復合增殖系數為42，1株試管苗1年可增殖2.3×1011株試管苗?！G江南’在1/2MS+NAA0.3 mg/L+IBA0.1 mg/L培養(yǎng)基中進行生根，生根率91.6%，‘白云如羅’的生根培養(yǎng)基為1/2MS+NAA0.5 mg/L+IBA0.3 mg/L，生根率100%；將經過生根的試管苗煉苗3 d后移栽到草炭土：蛭石：園土=1：1：1基質中，移栽成活達96.7%；在試管苗成活后施用‘花多多10號’稀釋2000倍液進行施