14,15-EET通過調(diào)控中性粒細(xì)胞的功能促進(jìn)腫瘤微小轉(zhuǎn)移休眠病灶發(fā)展的初步研究.pdf

1、目的：探討14,15-EET通過調(diào)控中性粒細(xì)胞的功能對(duì)腫瘤微轉(zhuǎn)移休眠病灶的影響，并對(duì)其機(jī)制進(jìn)行初步研究。
　　方法：⑴用TGF-β1/H2O2/LPS三種因素聯(lián)合刺激低侵襲轉(zhuǎn)移的MCF-7細(xì)胞10天后，尾靜脈接種裸鼠構(gòu)建腫瘤轉(zhuǎn)移休眠模型。14,15-EET尾靜脈給藥10次，觀察動(dòng)物生命體征，并在指定時(shí)間解剖觀察肺宏觀結(jié)節(jié)生成情況，H&E染色評(píng)價(jià)比較肺組織轉(zhuǎn)移病灶差異；⑵Real-time PCR檢測(cè)上述模型肺組織的Itgam以及L

2、y6G的mRNA表達(dá)水平，免疫組化染色檢測(cè)并比較肺組織內(nèi)中性粒細(xì)胞浸潤情況；⑶免疫熒光技術(shù)檢測(cè)上述轉(zhuǎn)移模型肺組織腫瘤結(jié)節(jié)中的血管生成情況；Real-time PCR檢測(cè)體內(nèi)肺組織和體外培養(yǎng)T/H/L-MCF-7的Vegfa（VEGFA）、Mmp9（MMP9）mRNA表達(dá)水平；用抗Ly6G抗體清除小鼠體內(nèi)PMN后，Real-time PCR檢測(cè)轉(zhuǎn)移模型肺組織中Mmp9表達(dá)水平的變化；⑷分離14,15-EET處理或者未處理的小鼠骨髓PMN，

3、按一定比例與腫瘤細(xì)胞混合接種小鼠大腿肌肉，10天后觀察局部腫瘤生長情況并稱重比較；Real-time PCR檢測(cè)14,15-EET處理或未處理后骨髓中性粒細(xì)胞的Mmp9和Trail的mRNA表達(dá)水平。
　　結(jié)果：①14,15-EET能夠促進(jìn) T/H/L-MCF-7在肺內(nèi)形成的腫瘤休眠病灶的繼續(xù)生長；②14,15-EET能夠?qū)е履[瘤休眠病灶中大量中性粒細(xì)胞的浸潤；③14,15-EET能夠誘導(dǎo)肺內(nèi)腫瘤轉(zhuǎn)移休眠病灶的微血管生成，其促血管

4、生成效應(yīng)是通過上調(diào)轉(zhuǎn)移病灶內(nèi)中性粒細(xì)胞來源的Mmp9表達(dá)水平所介導(dǎo)的；④14,15-EET作用后的骨髓中性粒細(xì)胞Mmp9的mRNA水平明顯上調(diào)，Trail明顯下調(diào)，且宏觀動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果也表明中性粒細(xì)胞的抑瘤功能轉(zhuǎn)變?yōu)榇倭龉δ堋?br>　　結(jié)論：14,15-EET能夠促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移休眠病灶的進(jìn)一步發(fā)展，主要是通過減少中性粒細(xì)胞抑瘤因子的表達(dá)釋放而改變其功能，促進(jìn)PMN浸潤至腫瘤微環(huán)境并通過表達(dá)Mmp9發(fā)揮促腫瘤血管生成作用，最終導(dǎo)致休眠腫瘤的