Up4A調(diào)節(jié)大鼠VSMCs myocardin mRNA表達(dá)的研究.pdf

1、目的: Myocardin可以促進血管平滑肌細(xì)胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)的分化,在血管的發(fā)育過程中起著重要作用,四磷酸脲腺苷(uridineadenosine tetraphosphate, Up4A)是最近發(fā)現(xiàn)的內(nèi)皮源性血管收縮因子(endothelial-derived constricting factor, EDCF),因此我們的研究目的是探討Up4A是否促進大鼠VSMCs中myo

2、cardin mRNA表達(dá)。 方法: 組織塊貼壁法培養(yǎng)大鼠主動脈VSMCs,4-8代的SMCs用于實驗。首先將細(xì)胞接種至24孔板中培養(yǎng),用高糖DMEM/F12培養(yǎng)基(0.5％FBS, 1％penicillin-streptomycin)培養(yǎng)基饑餓72 h后,分別用60 mM KCl或不同濃度Up4A(100、10、1、0.1、0.01、0.001 μM)處理細(xì)胞24 h,然后提取總RNA,將RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA后,采用實時熒光

3、定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Real-timequantitative polymerase chain reaction, Real-time PCR)法,以β-actin為內(nèi)參基因,測定大鼠VSMCs中myocardin mRNA表達(dá)情況。 結(jié)果: 1.如文獻(xiàn)報道KCl處理可促進myocardin mRNA的表達(dá),結(jié)果所示,用60 mM KCl刺激大鼠VSMCs后myocardin mRNA相對表達(dá)量為1.00±0.16,

4、n=3,而陰性對照組(Control)為0.45±0.16, n=3(p<0.05)。 2.用1 nM Up4A刺激大鼠VSMCs后myocardin mRNA表達(dá)明顯升高(1.21±0.19, n=3),同Control比較(0.45±0.16, n=3)具有顯著性差異(p<0.05)。然而,高濃度Up4A(100、10、1、0.1、0.01 pM)對myocardinmRNA的影響無顯著性差異。 結(jié)論: 1.