口服表達(dá)幽門螺桿菌抗原的重級乳酸乳球菌對小鼠免疫保護(hù)作用.pdf

1、目的:
　　 對本課題組前期構(gòu)建好的H.pylori重組疫苗菌株進(jìn)行驗證、誘導(dǎo)、表達(dá)。通過口服灌胃免疫接種BALB/c小鼠，連續(xù)免疫一個月后，用H.pylori國際標(biāo)準(zhǔn)株11637進(jìn)行攻擊，檢測小鼠胃內(nèi)H.pylori定植量，評價不同疫苗所產(chǎn)生的免疫應(yīng)答和免疫保護(hù)效果。
　　 方法:
　　 1.將過夜培養(yǎng)好的乳酸菌NZ3900/pNZ8110-ureB、NZ3900/pNZ8110-lpp20、NZ3900/pN

2、Z8110-omp22-hpaA、NZ3900/pNZ8149-ureB、NZ3900/pNZ8110-LysM-hpaA、NZ3900/pNZ8149-SPusp45-ureBnisin誘導(dǎo)表達(dá)，離心提取相關(guān)蛋白，經(jīng)SDS-PAGE電泳鑒定重組菌免疫蛋白表達(dá)水平，Western-blot鑒定重組蛋白免疫反應(yīng)性。
　　 2.將過夜培養(yǎng)好的基因工程重組菌TB1（pMAL-c2X-ureB）、TB1(pMAL-c2X-hpaA)、T

3、B1(pMAL-c2X-lpp20)、TB1(pMAL-c2X-omp22)IPTG誘導(dǎo)表達(dá)超聲破碎提取上清蛋白，經(jīng)SDS-PAGE驗證后，應(yīng)用直鏈淀粉親和層析柱進(jìn)行純化，使用BCA蛋白定量試劑盒測定純化蛋白的濃度。
　　 3.將BALB/c小鼠隨機(jī)分為9組，口服免疫后，收集一半小鼠的血清和胃液，酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)法檢測特異性抗體含量水平。剩下小鼠用H.pylori進(jìn)行灌胃攻擊，2周后處死小鼠，取小鼠胃組織做尿素酶半

4、定量實驗。
　　 4.統(tǒng)計學(xué)分析
　　 應(yīng)用SPSS17.0進(jìn)行統(tǒng)計分析。各組資料進(jìn)行正態(tài)性檢驗后，采用單因素方差分析對各組之間保護(hù)率進(jìn)行評價。
　　 結(jié)果:
　　 1.SDS-PAGE膠照片顯示Nisin誘導(dǎo)重組蛋白Lpp20、UreB、Omp22-HpaA、LysM-HpaA分別在19kd、66kd、53kd、29kd處顯示雜交條帶，Western-blot顯示各重組蛋白均有良好的免疫原性和免疫反應(yīng)性

5、。
　　 2.各基因工程重組菌誘導(dǎo)表達(dá)經(jīng)直鏈淀粉親和層析柱純化后，SDS-PAGE顯示在相應(yīng)條帶均有雜交條帶。
　　 3.BALB/c小鼠口服灌胃后，NZ3900/pNZ8110-LysM-hpaA組血清IgG含量最高，其余各重組菌株組均高于陰性對照組(P＜0.05)。H.pylori灌胃攻擊后，快速尿素酶檢法顯示:各重組乳酸菌組OD450值均低于對照組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。
　　 結(jié)論: