雙向電泳與質(zhì)譜相結(jié)合篩選雞腦組織中TOCP誘發(fā)OPIDN相關蛋白.pdf

1、目的：以“有機磷化合物和PMSF的雙受體影響”假說為理論依據(jù)，通過雙向電泳和質(zhì)譜分析，篩選OPIDN誘發(fā)相關差異表達蛋白，并探討TOCP的OPIDN作用機制。
　　 方法：羅曼鶴母雞24只，10月齡，體重1.5～2.0kg，適應性喂養(yǎng)一周后用于試驗。根據(jù)“雙受體影響假說”分別將雞隨機分為4組，即對照組、TOCP組、PMSF組和PMSF+TOCP組。TOCP用量為1000mg/kg，經(jīng)灌胃一次給予、PMSF用量為40mg/kg，經(jīng)

2、皮下注射一次給予。PMSF+TOCP組為先給PMSF，24小時后再給TOCP。染毒后7天處死動物，取各組動物腦組織。并且測定四組雞大腦雙向電泳表達圖譜。在雙向電泳表達圖譜篩選差異明顯的點進行質(zhì)譜鑒定。
　　 雙向電泳原始文件用imagemaster2Dplatinum軟件搜索相應的數(shù)據(jù)庫，蛋白表達差異2倍以上的點視為差異顯著。將差異表達蛋白點的肽質(zhì)量指紋譜和分子量、等電點的數(shù)據(jù)輸入計算機，用MASCOT軟件的MS MS離子方式在

3、蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫中搜索，找尋與之匹配的相關蛋白質(zhì)，同時查詢其功能。肽質(zhì)量指紋譜容許誤差0.3Da，分子量容許誤差±20％。
　　 結(jié)果：在對照組和1000mg/kgTOCP染毒組的雞大腦總蛋白中分別檢測到1332和1295個蛋白點，能相互匹配的占78.31%。PMSF和PMSF+TOCP兩組分別檢測到1295和1294個蛋白點，且與對照組的匹配率均大于75%。與對照組相比，TOCP染毒組雞腦中具有顯著差異表達的蛋白點有236個，其中

4、差異達到4倍以上的蛋白點數(shù)有32個。根據(jù)“雙受體影響假說”篩選出其中差異最明顯的4個點進行質(zhì)譜鑒定，鑒定結(jié)果為1612點主要為谷氨酰胺(GS)，等電點為8.26，分子量為31.66kD。1171點為熱休克蛋白70(HSP-70)，等電點為7.57，分子量為41.81kD。1457點為乳酸脫氫酶(LDH-B)，等電點為7.71，分子量為35.58kD。1067點荷馬蛋白(homer-1b)，等電點為5.54，分子量為44.40kD。且這四