重組截短型人角質(zhì)細(xì)胞生長因子（rhKGF-,des1-23-）的克隆、表達(dá)與活性初步檢測.pdf

1、角質(zhì)細(xì)胞生長因子(Keratinocyte Growth Factor)是成纖維細(xì)胞生長因子家族的一員，它通過與受體(KGFR)的結(jié)合，特異性地刺激上皮細(xì)胞的增殖，對皮膚、胃、腸、腎、膀胱、肺等上皮的損傷有修復(fù)作用，能減少放化療所帶來的副作用。而N端前23位氨基酸殘基缺失后的截短型KGF(KGF<,des1-23>)具有更高的穩(wěn)定性和活性。 為了制備高純度和高活性的人截短型KGF，本研究采用基因重組技術(shù)，選擇單一、融合和分泌三種

2、表達(dá)方式構(gòu)建了多個不同的原核表達(dá)菌株，并構(gòu)建了巴斯德畢赤酵母胞外和胞內(nèi)表達(dá)兩種菌株，分析了不同菌株的表達(dá)情況。本研究還摸索了表達(dá)菌株的發(fā)酵工藝、探索了不同形式表達(dá)產(chǎn)物(包涵體、可溶蛋白和融合蛋白)的純化工藝。本研究還通過蛋白N端測序和免疫印跡對目標(biāo)蛋白進(jìn)行了鑒定。最后，采用上皮細(xì)胞和間質(zhì)細(xì)胞進(jìn)行了促細(xì)胞增殖活性的檢測。 最終，本研究得到了兩個原核表達(dá)菌株，初步建立了純化工藝并獲得少量的目標(biāo)產(chǎn)物;蛋白N端測序和免疫印跡驗(yàn)證結(jié)果表明