人角質(zhì)細(xì)胞生長因子轉(zhuǎn)化胡蘿卜和水稻初探.pdf

1、利用植物作為生物反應(yīng)器生產(chǎn)具有醫(yī)用價(jià)值的蛋白或者抗體是植物基因工程的一個研究熱點(diǎn)。同大腸桿菌等微生物相比，植物作為生物反應(yīng)器具有翻譯后正確的修飾、加工，生產(chǎn)成本低，不需要純化，可以直接食用等優(yōu)點(diǎn)。角質(zhì)細(xì)胞生長因子(Keratinocytegrowthfactor，KGF)蛋白由194個氨基酸組成，其基因含有三個外顯子，兩個內(nèi)含子，是一種促細(xì)胞分裂因子。KGF在表皮細(xì)胞的生長和更新過程中起重要作用，能加快膀胱、腎和腸的損傷修復(fù)和促人角膜上

2、皮細(xì)胞生長。另外，KGF在放、化療帶來的損傷修復(fù)方面也起著重要作用。有關(guān)KGF的原核表達(dá)，已有相當(dāng)多的報(bào)道，而利用植物為反應(yīng)器表達(dá)KGF的研究還較為少見。因此，利用水稻和胡蘿卜等植物為反應(yīng)器生產(chǎn)KGF蛋白將是一種新的嘗試。本實(shí)驗(yàn)以人DNA為模板，PCR擴(kuò)增獲得角質(zhì)細(xì)胞生長因子外顯子2和外顯子3；合成單鏈的寡核苷酸，經(jīng)鏈延伸和PCR擴(kuò)增從而獲得外顯子1。應(yīng)用延伸PCR將三個外顯子連接得KGF編碼序列。并連接CaMV35S啟動子和NOS終止