Ⅱ型轉(zhuǎn)化生長因子β受體親和短肽篩選及抗肝纖維化實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：應(yīng)用噬菌體隨機(jī)十二肽庫篩選Ⅱ型轉(zhuǎn)化生長因子β受體親和短肽，觀察Ⅱ型轉(zhuǎn)化生長因子β受體親和短肽在CCl4誘導(dǎo)的小鼠肝纖維化模型中的抗肝纖維化作用，為探索抗肝纖維化的新方法提供基礎(chǔ)。 方法：應(yīng)用噬菌體隨機(jī)十二肽庫，以Ⅱ型轉(zhuǎn)化生長因子β受體作為靶標(biāo)，經(jīng)過3輪淘選，篩選與Ⅱ型轉(zhuǎn)化生長因子β受體具有親和性的噬菌體克隆，提取陽性噬菌體克隆ssDNA，測(cè)序并進(jìn)行序列分析；選擇其中出現(xiàn)頻率高的3種展示肽，根據(jù)其氨基酸序列合成親和短肽，應(yīng)用

2、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)體外測(cè)定偶聯(lián)多肽與Ⅱ型轉(zhuǎn)化生長因子β受體的結(jié)合強(qiáng)度；應(yīng)用CCl4制作小鼠肝纖維化模型，給予親和短肽C1，C2，C3施行干預(yù)治療，同時(shí)設(shè)立正常對(duì)照組、模型組、秋水仙堿組，造模5周后采血并處死小鼠，檢測(cè)血清中ALT、ALB、TP含量．取肝組織測(cè)定羥脯氨酸含量，制作病理組織切片，作HE染色和Masson染色，對(duì)肝臟炎癥活動(dòng)度和纖維化程度進(jìn)行分析。 結(jié)果：通過篩選顯示噬菌體得到富集，挑選的12個(gè)能與人Ⅱ型轉(zhuǎn)化生長因子β受

3、體特異性結(jié)合的噬菌體克隆，測(cè)序得到6種展示肽核酸序列，未發(fā)現(xiàn)與轉(zhuǎn)化生長因子-β1存在共有保守序列；人工合成的親和短肽C2和C3與Ⅱ型轉(zhuǎn)化生長因子β受體結(jié)合力弱，未見明顯的抗肝纖維化作用；親和短肽C1與Ⅱ型轉(zhuǎn)化生長因子β受體結(jié)合力最強(qiáng)，用于抗肝纖維化治療能減輕炎癥、減少膠原纖維形成，肝纖維化分級(jí)明顯降低，與肝纖維化小鼠模型組相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論：篩選噬菌體隨機(jī)十二肽庫能夠獲得Ⅱ型轉(zhuǎn)化生長因子β受體高親和力的噬菌體展示肽；