肝組織堿性成纖維細(xì)胞生長因子及轉(zhuǎn)化生長因子β-,1-與乙肝患者肝纖維化關(guān)系的研究.pdf

1、目的：觀察堿性成纖維細(xì)胞生長因子(bFGF)及轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)在慢性乙型肝炎肝纖維化不同進(jìn)展階段的免疫組化表達(dá)和定位情況，探討二者在肝纖維化發(fā)生過程中的作用及其與肝臟炎癥、血清肝纖維化指標(biāo)的相關(guān)性，為bFGF、TGF-β1作為反映肝纖維化的指標(biāo)提供了理論依據(jù)，并提示可以針對二者開展抗纖維化治療的研究。 方法： 1病例選擇：隨機(jī)選取260例2005年7月至2007年9月我院住院的慢性乙型肝炎患者，按照200

2、0年西安會議修訂《病毒性肝炎防治方案》的診斷標(biāo)準(zhǔn)，其中慢性肝炎輕度60例，中度78例，重度66例，肝硬化56例；正常對照組30例，其標(biāo)本于肝血管瘤或單純膽囊切除術(shù)中取材。 2實(shí)驗(yàn)方法：所有患者于肝穿刺活檢前兩日內(nèi)抽取空腹靜脈血行肝功能、凝血酶原活動度(PTA)及血清肝纖四項：透明質(zhì)酸(HA)、Ⅲ型前膠原(PCⅢ)、層粘連蛋白(LN)、Ⅳ型膠原(CⅣ)檢測，肝纖四項采用放射免疫法。所有患者行肝組織穿刺活檢，取肝組織標(biāo)本長度均在1.

3、0cm-1.5cm之間，肝組織標(biāo)本依次進(jìn)行HE染色、MASSON三色染色、網(wǎng)狀纖維染色及bFGF、TGF-β1免疫組化染色，用HPIAS 1000高清晰度彩色病理圖文分析系統(tǒng)對肝臟bFGF、TGF-β1進(jìn)行圖象定量分析。觀察bFGF及TGF-β1在正常對照組及慢性乙型肝炎肝纖維化不同進(jìn)展階段的表達(dá)、定位特點(diǎn)，并進(jìn)行定量分析和相關(guān)性分析，各組間用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)比較。結(jié)果： 1肝組織bFGF免疫組化染色觀察結(jié)果及

4、定量分析結(jié)果：bFGF染色陽性物質(zhì)呈棕黃色。S0期，bFGF不表達(dá)或僅表達(dá)于個別散在的肝細(xì)胞漿內(nèi)及血管內(nèi)皮細(xì)胞，且著色較淺；S1，S2期，bFGF表達(dá)部位主要以肝細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞為主，同時在炎癥壞死區(qū)、匯管區(qū)的膽管上皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞可呈陽性反應(yīng)，且著色深；S3、S4期，bFGF陽性表達(dá)部位主要集中在血管纖維化間隔及肝竇壁、肝竇內(nèi)皮細(xì)胞，同時亦可在肝細(xì)胞、固縮肝細(xì)胞、炎癥壞死區(qū)表達(dá)，且表達(dá)強(qiáng)度呈明顯遞增趨勢。S0組為對照組，S1、S2

5、、S3、S4組的肝組織bFGF的面密度較S0組明顯增加，其差異具有顯著性(P值均<0.05)，S1-S4組的組間兩兩比較，bFGF的面密度逐漸增加，亦均具有顯著性差異(P值均<0.05)。按炎癥活動度級別分組，G0組為對照組，G1、G2、G3、G4組的肝組織bFGF面密度較G0組明顯增加，其差異具有顯著性(P值均<0.05)，而G1-G4組之間兩兩比較則無顯著性差異(P值均>0.05)。結(jié)果表明肝臟bFGF表達(dá)面積及強(qiáng)度隨纖維化程度加重

6、而增加，與炎癥活動度關(guān)系不密切，但無炎癥時，bFGF合成亦不會增加。 2肝組織TGF-β1免疫組化染色觀察結(jié)果及定量分析結(jié)果：TGF-β1染色陽性物質(zhì)呈棕黃色。S0期未見明顯陽性物質(zhì)，S1、S2期陽性物質(zhì)主要分布在肝竇壁及竇周細(xì)胞、壞死灶及匯管區(qū)，著色較淺；S3期、S4期在纖維間隔和肝細(xì)胞中均有分布，且著色深，S4期肝細(xì)胞內(nèi)可見大量染色陽性物質(zhì)。按肝組織纖維化程度期別分組，S0組為對照組，S1、S2、S3、S4組的肝組織TGF-

7、β1的面密度較S0組明顯增加，其差異具有顯著性(P值均<0.05)，S1-S4組的組間兩兩比較，TGF-β1的面密度逐漸增加，亦均具有顯著性差異(P值均<0.05)。按炎癥活動度級別分組，G0組為對照組，G1、G2、G3、G4組的肝組織TGF-β1面密度較GO組明顯增加，其差異具有顯著性(P值均<0.05)，而G1-G4組之間兩兩比較則無顯著性差異(P值均>0.05)。結(jié)果表明肝臟。TGF-β1水平與纖維化程度密切相關(guān)，隨纖維化程度加重

8、而表達(dá)增多，與炎癥活動度則無固定關(guān)系，但無炎癥存在時TGF-β1不會高水平表達(dá)。 3肝纖維化不同分期的血清HA、PCⅢ、LN、CⅣ檢測結(jié)果：S0組為對照組，S1、S2、S3、S4組的血清肝纖指標(biāo)較S0明顯增加，其差異具有顯著性(P值均<0.05)，從S1-S4組，血清肝纖指標(biāo)逐漸增加，除PCⅢ、CⅣ的S1組與S2組比較無顯著性差異(P>0.05)外，余各組問兩兩比較均有顯著性差異(P值均<0.05)。 4肝組織bFGF的表達(dá)程度

9、與TGF-β1的表達(dá)程度呈高度正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)為0.895(P<0.05)。肝組織bFGF表達(dá)水平與血清HA、PCⅢ、LN、CⅣ之間均呈正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)分別為0.705、0.793、0.787、0.621(P值均<0.05)：肝組織TGF-β1的表達(dá)水平亦與HA、PCⅢ、LN、CⅣ均呈正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)分別為0.724、0.738、0.751、0.685(P值均<0.05)。 5肝組織bFGF與谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(A

10、ST)之間無相關(guān)性(P值均>0.05)，與總膽紅素(TBiL)之間呈弱正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)為0.526(P<0.05)，與白蛋白(ALB)、膽堿酯酶(ChE)、凝血酶原活動度(PTA)均呈負(fù)相關(guān)，相關(guān)系數(shù)分別為-0.749、-0.783、-0.702(P值均<0.05)。肝組織TGF-β1與ALT、AST之間無相關(guān)性(P值均>0.05)，與TBiL之間呈弱正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)為0.496(P<0.05)，與ALB、ChE、PTA均呈負(fù)相關(guān)，相關(guān)

11、系數(shù)分別為-0.743、-0.758、-0.692(P值均<0.05)。結(jié)論：(1)在正常肝組織中的bFGF不表達(dá)或僅表達(dá)于個別散在的肝細(xì)胞漿內(nèi)及血管內(nèi)皮細(xì)胞，在肝纖維化時表達(dá)部位主要集中在血管纖維化間隔及肝竇壁、肝竇內(nèi)皮細(xì)胞等；而TGF-β1在正常肝組織基本不表達(dá)，在肝纖維化時表達(dá)部位主要在肝細(xì)胞中和纖維間隔等。(2)肝臟bFGF及TGF-β1的表達(dá)在肝纖維化的啟動階段需要炎癥刺激，但肝纖維化進(jìn)展到一定階段后，二者與活化的肝星狀細(xì)胞(

12、HSC)之間形成自分泌環(huán)路，促使肝纖維化自行延續(xù)，不再依賴于炎癥刺激。(3)肝組織bFGF、TGF-β1及血清肝纖四項均能較好反映肝纖維化程度，且相互之間成正相關(guān)。(4)測定肝臟bFGF及TGF-β1還能在一定程度上了解慢性肝炎患者的肝臟合成儲備功能，以利于判斷預(yù)后。(5)bFGF與TGF-β1是聯(lián)系與肝纖維化相關(guān)的基質(zhì)產(chǎn)生細(xì)胞及其它細(xì)胞因子的樞紐，因此，bFGF及TGF-β1不僅可作為評價肝纖維化嚴(yán)重程度的重要指標(biāo)之一，同時也為今后以