藍(lán)靛果花色苷結(jié)構(gòu)表征及對輻射誘導(dǎo)氧化損傷防護(hù)機制.pdf

1、電離輻射能誘導(dǎo)機體生成活性氧自由基,導(dǎo)致細(xì)胞和組織發(fā)生氧化應(yīng)激反應(yīng),造成機體神經(jīng)、造血、消化和免疫系統(tǒng)發(fā)生急性或慢性損傷,因此,篩選和評價具有優(yōu)良抗氧化、抗輻射活性的天然產(chǎn)物成分已成為醫(yī)學(xué)、生物學(xué)和食品科學(xué)研究的熱點。本論文以藍(lán)靛果花色苷(AnthocyaninfromLoniceracaeruleavar.edu-lis,ALC)為研究對象,對ALC分離純化工藝進(jìn)行了優(yōu)化,并對ALC進(jìn)行了結(jié)構(gòu)表征;對ALC抗氧化、抗輻射活性和對輻射誘

2、導(dǎo)氧化傷害防護(hù)作用及機制進(jìn)行了系統(tǒng)的研究。主要研究結(jié)果如下:
　　采用超聲波輔助提取法分離提取了ALC,通過響應(yīng)面法優(yōu)化得到ALC最佳提取工藝條件:提取時間97min,料液比1:16.35,乙醇濃度47％;單次提取率為86.53%,反復(fù)提取3次,總提取率達(dá)94.70%。大孔樹脂層析法純化ALC最優(yōu)條件:采用AB-8型大孔樹脂,50%乙醇(HCl調(diào)pH值至3.0)為洗脫劑,徑高比1:15,洗脫流速1.5BV/h,洗脫劑用量4.0BV

3、,所得ALC色價為79.68與粗提物(色價3.58)相比,純化倍數(shù)為22.26。
　　采用高效液相色譜-二極管陣列檢測器(HPLC-DAD)、高效液相色譜-電噴霧離子阱質(zhì)譜(HPLC-ESI-IT-MS)和高分辨質(zhì)譜(Q-TOF-MS)技術(shù),結(jié)合紫外-可見光譜(UV-VIS)、紅外光譜(IR)分析技術(shù)對ALC進(jìn)行了結(jié)構(gòu)表征。從ALC中發(fā)現(xiàn)8種花色苷,分別是矢車菊素-3-槐糖-5-葡萄糖苷、矢車菊素-3,5-二葡萄糖苷、矢車菊素-3

4、(阿魏酰)-葡萄糖苷、矢車菊素-3-葡萄糖苷、矢車菊素-3-蕓香苷、天竺葵素-3-葡萄糖苷、芍藥素-3-葡萄糖苷和芍藥素-3-蕓香糖苷,相對質(zhì)量百分含量分別為1.12%、3.71%、1.38%、72.42%、9.62%、2.30%、7.10%和2.34%。
　　系統(tǒng)性研究了ALC的體外抗氧化活性作用,清除生理自由基、非生理自由基、總還原能力和抑制脂質(zhì)過氧化能力。結(jié)果表明,ALC具有很強的傳遞氫原子能力,可以通過提供氫原子直接清除羥

5、基自由基(·OH)或終止自由基的鏈反應(yīng),從而防止自由基誘導(dǎo)氧化損傷的發(fā)生。同時,ALC具有較高的抗氧化活性和還原能力,對于脂質(zhì)過氧化具有一定的抑制作用,并呈良好的劑量效應(yīng)關(guān)系。
　　建立X了射線和60Coγ輻射誘導(dǎo)細(xì)胞損傷模型,結(jié)果表明,ALC可以拮抗電離輻射損傷作用,提高輻射損傷小鼠脾淋巴細(xì)胞活力,降低小鼠脾淋巴細(xì)胞DNA的輻射損傷程度。建立60Coγ輻射誘導(dǎo)氧化損傷動物模型,對ALC的輻射防護(hù)作用進(jìn)行研究。結(jié)果表明,ALC能減

6、輕輻射造成小鼠免疫器官的損傷,顯著增加小鼠各臟器中超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)活性,提高還原型谷胱甘肽(GSH)含量,降低丙二醛(MDA)含量,有效激活抗氧化酶系,減少脂質(zhì)過氧化,減輕細(xì)胞膜的氧化損傷,降低小鼠外周血淋巴細(xì)胞異形和骨髓細(xì)胞微核率。
　　通過蛋白免疫印跡技術(shù)(Westernblot)對小鼠肝臟組織MAPK信號通路和線粒體介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡信號通路主要相關(guān)蛋白表達(dá)進(jìn)行了研究。結(jié)果表明,ALC

7、對輻射致小鼠肝臟組織細(xì)胞蛋白表達(dá)具有顯著的調(diào)控作用。ALC防護(hù)輻射誘導(dǎo)機體氧化損傷的作用機制是:ALC能誘導(dǎo)小鼠肝臟組織細(xì)胞中Bcl-2表達(dá)上調(diào),阻抗輻射引起B(yǎng)ax表達(dá)升高,誘導(dǎo)HSP70表達(dá)升高,阻抗輻射誘導(dǎo)的p-JNK1/2和p-p38表達(dá)升高,從而降低活化caspase-3表達(dá),減少細(xì)胞凋亡。
　　ALC能夠改善由電離輻射誘導(dǎo)的氧化損傷,降低活性氧自由基的產(chǎn)生,調(diào)節(jié)細(xì)胞氧化還原和凋亡信號轉(zhuǎn)導(dǎo),抑制線粒體凋亡信號途徑,對輻射誘