滋腎益肝方體內(nèi)外抗衰老機(jī)制的研究.pdf

1、近年來,隨著人口老齡化問題的日趨嚴(yán)重,老年疾病(如阿爾茨海默病(AD)、帕金森病(PD))的發(fā)生率也日漸增多,給家庭和社會(huì)帶來了很大的負(fù)擔(dān),因此延緩衰老、提高老年人生活質(zhì)量成為當(dāng)前研究關(guān)注的熱點(diǎn)。越來越多的抗衰老藥物被研究和發(fā)現(xiàn)并應(yīng)用于臨床治療,其中包括單味中藥和中藥復(fù)方制劑,但中藥復(fù)方制劑經(jīng)過一定程度的抗衰老藥理學(xué)研究者卻屈指可數(shù)。滋腎益肝方作為一復(fù)方制劑,包括多味中藥,文獻(xiàn)研究發(fā)現(xiàn)其可能具有較強(qiáng)的抗衰老作用,所以本文通過體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)研

2、究了滋腎益肝方的抗衰作用及其機(jī)制。
　　 目的：觀察滋腎益肝丸方體內(nèi)外抗衰老和抗氧化作用,并探討其機(jī)制。
　　 方法：1、動(dòng)物體內(nèi)實(shí)驗(yàn)研究滋腎益肝方的抗衰老作用及機(jī)制:選ICR小鼠,隨機(jī)分成六組:正常對(duì)照組、衰老模型組、維生素E組、滋腎益肝方低、中、高(5、10、20g生藥材·Kg-1·d-1)組。除正常組外,其他各組按150mg·Kg-1·d-1的劑量皮下注射D-半乳糖致衰老模型,同時(shí)給后四組灌胃維生素E,低、中、高劑

3、量的滋腎益肝方藥液。六周后,用Morris水迷宮法測(cè)定各組小鼠的逃避潛伏期和穿越原平臺(tái)的次數(shù)來檢測(cè)其學(xué)習(xí)記憶能力;之后眼球取血,斷頸法處死小鼠,分別測(cè)定小鼠的胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù),血漿SOD活性和NO含量,肝臟中SOD、GSH-Px活性和MDA的水平以及腦組織中SOD活性和MDA的水平。結(jié)果1與正常組比較,模型組的逃避潛伏期由31.1±11.6s延長(zhǎng)至45.4±13.9s(P＜0.05),穿越原平臺(tái)的次數(shù)由3±.0降低至1±1.0(P＜0

4、.01);胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)分別由0.1227±0.04降低至0.0683±0.01及0.2312±0.02至0.1942±0.02(P＜0.01);血漿、肝臟、腦組織中SOD活性分別由69.57±6.6U/ml降低至60.43±4.7U/ml(P＜0.05):29.88±2.2U/mgprot降低至25.81±2.5 U/mgprot(P＜0.05)及45.62±5.0 U/mgprot降低至35.45±4.8 U/mgprot(P＜

5、0.01);肝臟、腦中的MDA含量則分別由3.62±0.8 nmol/mgprot升至6.76±1.6 nmol/mgprot及6.15±0.4 nmol/mgprot升至7.54±0.4 nmol/mgprot(P＜0.01);血漿中NO的含量由62.10±3.4pmol/L升高至74.38±6.5μmol/L(P＜0.01);肝中GSH-Px活性也由324.2±41.1 U/mgprot降至218.7±27.6 U/mgprot(P

6、＜0.01)。而與模型組比較,滋腎益肝方各給藥組的逃避潛伏期縮短為20.6±8.7s、28.5±6.6 s、14.0±9.0 s(P＜0.01),穿越原平臺(tái)的次數(shù)增加到3±1.6、4±2.0、5±1.7(P＜0.01);胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)明顯升高,分別為0.0983±0.03、0.1165±0.03、0.1213±0.03(P＜0.01);0.2476±0.03(P＜0.05)、0.2781±0.03(P＜0.01)、0.2319±0.

7、02(P＜0.01);血漿、肝臟、腦組織中SOD活性分別增加為83.42±7.0U/ml(P＜0.01)、81.55±8.0U/ml(P＜0.01)、67.01±9.0U/ml;33.35±3.OU/mgprot(P＜0.01)、31.66±2.7U/mgprot(P＜0.01)、29.12±3.5U/mgprot(P＜0.05);54.83±4.6U/mgprot、53.32±3.8U/mgprot、48.48±5.9U/mgprot

8、(P＜0.01);肝臟、腦中的MDA含量則顯著下降,分別為4.02±0.8nmol/mgprot、4.50±1.0nmol/mgprot、4.02±0.7nmol/mgprot(P＜0.01);5.64±0.7nmol/mgprot、5.76±0.5nmol/mgprot、4.87±0.7nmol/mgprot(P＜0.01);血漿中NO的含量明顯降低為61.79±5.1μmol/L(P＜0.01)、66.99±11.2μmol/L、6

9、0.08±5.0μmol/L(P＜0.01);肝中GSH-Px活性也顯著提高到307.9±67.2 U/mgprot、315.0±60.2 U/mgprot、299.1±70.9U/mgprot(P＜0.01)。方法：2、體外實(shí)驗(yàn):用MTT實(shí)驗(yàn)測(cè)定TSG和滋腎益肝方藥液對(duì)H2O2誘導(dǎo)的PCl2細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷的保護(hù)作用。實(shí)驗(yàn)分為正常組、H2O2組、H2O2+TSG(0.1、1、5、10、50μmol/L)組、H2O2+滋腎益肝方藥液(0

10、.16、0.4、0.8μmol/L)組。先用不同濃度的H2O2作用細(xì)胞,選出最佳作用濃度,根據(jù)結(jié)果選擇300μmol/L作為H2O2的作用劑量。種96孔板,先用TSG和藥液作用細(xì)胞24h,再加H2O2處理24h,加MTT,測(cè)定OD值,計(jì)算細(xì)胞存活率。
　　 結(jié)果：2與正常組比較,H2O2處理細(xì)胞后,使細(xì)胞存活率由100±8.11％降低至85±5.02%(P＜0.01);用TSG和藥液預(yù)處理過的PCl2細(xì)胞再經(jīng)H2O2作用,其存活