高糖誘導(dǎo)系膜細胞表達TNF-α及IL-6的機制探討.pdf

1、目的：觀察高糖培養(yǎng)腎小球系膜細胞內(nèi)TNF-α、IL-6 mRNA表達以及p38MAPK特異性抑制劑、NF-κB特異性抑制劑對高糖培養(yǎng)系膜細胞內(nèi)TNF-α、IL-6 mRNA表達的影響，研究p38MAPK、NF-κB激活途徑是否介導(dǎo)高糖環(huán)境下系膜細胞內(nèi)TNF-α及IL-6的表達，初步探討糖尿病腎病時高糖誘導(dǎo)系膜細胞促炎因子表達的機制。
　　 方法：1.不同濃度葡萄糖干預(yù)體外培養(yǎng)系膜細胞，以western blotting方法檢測磷

2、酸化p38MAPK蛋白表達，細胞免疫熒光方法檢測NF-κBp65蛋白的表達，RT－PCR方法檢測細胞內(nèi)TNF-α、IL-6 mRNA的表達，觀察不同濃度葡萄糖刺激對系膜細胞內(nèi)p38MAPK、NF-κB活性及TNF-α、IL-6 mRNA表達的影響。2.分別用p38MAPK特異性抑制劑、NF-κB特異性抑制劑干預(yù)體外高糖培養(yǎng)系膜細胞，檢測TNF-α、IL-6 mRNA的表達，磷酸化p38MAPK蛋白及NF-κBp65蛋白的表達，檢測方法同

3、上，觀察抑制p38MAPK、NF-κB活性后系膜細胞內(nèi)TNF-α、IL-6 mRNA表達的變化。
　　 結(jié)果：1.隨著體外培養(yǎng)干預(yù)葡萄糖濃度增加，TNF-αmRNA表達逐漸升高，具有濃度依賴性；干預(yù)葡萄糖濃度在5.6～20mM時，IL-6 mRNA表達逐漸升高，具有濃度依賴性，但當(dāng)干預(yù)葡萄糖濃度達到25mM時，IL-6 mRNA表達反而下降；隨著體外培養(yǎng)干預(yù)葡萄糖濃度增加，磷酸化p38MAPK蛋白表達逐漸升高，具有濃度依賴性；隨

4、著體外培養(yǎng)干預(yù)葡萄糖濃度增加，NF-κBp65在胞核表達逐漸增多，胞漿表達逐漸減少，具有濃度依賴性。2. SB203580可明顯抑制p38MAPK蛋白活性，同時使高糖培養(yǎng)系膜細胞內(nèi)TNF-α、IL-6 mRNA表達下降；PDTC可明顯抑制NF-κB活性，同時使高糖培養(yǎng)系膜細胞TNF-α及IL-6 mRNA表達下降；同時抑制p38MAPK及NF-κB活性，高糖培養(yǎng)系膜細胞TNF-α及IL-6 mRNA表達下降更加明顯。
　　 結(jié)論