不同濃度高糖對離體乳鼠心臟成纖維細胞Ⅰ型膠原和內脂素表達的影響.pdf

1、目的：糖尿病是人類健康的嚴重威脅之一。糖尿病的各種并發(fā)癥，尤其心血管并發(fā)癥與糖尿病病人高死亡率密切相關。糖尿病心肌病(diabeticcardiomyopathy，DCM)作為一種糖尿病的早期并發(fā)癥，主要表現為左心室肥厚，心室舒張功能受損，后逐漸出現心室收縮功能障礙，最終發(fā)展為充血性心力衰竭。是糖尿病患者致死的重要原因之一。DCM主要的病理改變是心肌細胞壞死、肥大及心肌間質重構及纖維化。心臟成纖維細胞增殖和細胞外基質(Extracell

2、ular Matrix，ECM)過度沉積，是導致心肌纖維化的重要環(huán)節(jié)。ECM中最主要的是膠原纖維，在心臟組織Ⅰ型膠原約占ECM的80％。有研究表明，高血糖可誘導氧化損傷并引起ECM在心臟間質沉積，導致心室功能下降，是DCM引起心肌細胞壞死、肥大及纖維化的重要因素，在DCM的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮著重要作用。
　　內脂素(visfatin，VF)作為一種較新發(fā)現的脂肪細胞因子，有類胰島素作用，參與了炎癥、免疫調節(jié)及能量代謝的過程，與肥胖、

3、糖尿病、冠心病、代謝綜合征、充血性心力衰竭等復雜性疾病密切相關。但心臟成纖維細胞的內脂素分泌及與糖尿病引起的心肌病變的關系研究尚少。本文通過體外模擬糖尿病患者心臟成纖維細胞外環(huán)境研究其VF及Ⅰ型膠原的表達，闡明VF對心臟膠原沉積、間質重構及心肌纖維化可能存在的影響，以求進一步了解糖尿病心肌病的發(fā)病機制。
　　方法：無菌試驗條件下提取1～4日齡的Sprague-Dawley(SD)大鼠心臟成纖維細胞進行傳代培養(yǎng)，取第3代心臟成纖維細

4、胞進行實驗。在進行48h含血清培養(yǎng)，24h無血清培養(yǎng)之后，選取生長狀態(tài)好的細胞隨機分組。實驗分組分為：①對照組(NG：含5.5mmol/L葡萄糖)，②高糖組10mmol/L，③高糖組30mmol/L，④高糖組50mmol/L，⑤高滲組(OSM：含5.5mmol/L葡萄糖+19.5mmol/L甘露醇)，每組設3個復孔。所有分組在干預24h后，以GAPDH為內參，應用Real time PCR和ELISA技術檢測心臟成纖維細胞中VF和Ⅰ型膠

5、原的mRNA含量和培養(yǎng)基中VF和Ⅰ型膠原的表達水平。
　　結果：(一)高糖對心臟成纖維細胞Ⅰ型膠原表達的影響
　　與對照組比較，高糖組10mmol/L，30mmol/L，50mmol/L三組Ⅰ型前膠原mRNA表達均明顯增加，并有統(tǒng)計學差異(P<0.01)。與高滲透壓組比較，高糖組10mmol/L，30mmol/L，50mmol/L三組Ⅰ型前膠原mRNA表達均有增加，且有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。高滲透壓組Ⅰ型前膠原的基因表

6、達與對照組比較沒有統(tǒng)計學差異(P>0.05)。高糖組30mmol/L較高糖組10mmol/LⅠ型前膠原mRNA表達增多，且有統(tǒng)計學差異(P<0.01)。高糖組50mmol/L較高糖組30mmol/LⅠ型前膠原mRNA表達減少，但無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。
　　同時用酶聯免疫吸附測定法(ELISA)測定培養(yǎng)基中Ⅰ型膠原產物的含量表明：與對照組比較，高糖組10mmol/L，30mmol/L，50mmol/L三組Ⅰ型膠原表達均明顯增

7、加，并有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。與高滲透壓組比較，高糖組10mmol/L，30mmol/L，50mmol/L三組Ⅰ型膠原表達均增加且有統(tǒng)計學差異(P<0.01)。高滲透壓組Ⅰ型膠原的表達與對照組比較沒有統(tǒng)計學差異(P>0.05)。高糖30mmol/L組較10mmol/L組Ⅰ型膠原表達增多，且有統(tǒng)計學差異(P＜0.01)。50mmol/L組較30mmol/L組Ⅰ型膠原表達增多，但無統(tǒng)計學差異(P＞0.05)。
　　(二)高糖對心

8、臟成纖維細胞VF表達的影響
　　高糖組30mmol/L，50mmol/L組VFmRNA表達與對照組比較均增加且有統(tǒng)計學差異(P<0.01)：高糖10mmol/L組較對照組增加，也具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。高糖組30mmol/L，50mmol/L組VFmRNA表達與高滲透壓組比較均增加且有統(tǒng)計學差異(P<0.01)；高糖10mmol/L組較高滲透壓組VFmRNA表達增加但無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。高滲透壓組VF的基因表達與

9、對照組比較沒有統(tǒng)計學差異(P>0.05)。高糖組30mmol/L較高糖組10mmol/LVFmRNA表達增加，且有統(tǒng)計學差異(P<0.01)。高糖組50mmol/L較高糖組30mmol/LVFmRNA表達減少，但無統(tǒng)計學差異(P＞0.05)。
　　應用用酶聯免疫吸附測定法(ELISA)測定培養(yǎng)基中VF含量：與對照組比較，高糖組10mmol/L，30mmol/L，50mmol/L三組VF均有所增加，且有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。與

10、高滲透壓組比較，高糖組10mmol/L，30mmol/L，50mmol/L三組VF均有所增加，且均有統(tǒng)計學差異(P<0.01)。高滲透壓組VF的表達與對照組比較沒有統(tǒng)計學差異(P>0.05)。高糖組30mmol/L較高糖組10mmol/LVF表達增多，且有統(tǒng)計學差異(P<0.01)。高糖組50mmol/L較高糖組30mmol/LVF表達稍減少，但無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。
　　結論：高糖可促進心臟成纖維細胞VF和Ⅰ型膠原的表達