不同濃度高糖對(duì)新生大鼠心肌細(xì)胞內(nèi)脂素表達(dá)的影響.pdf

1、目的:長(zhǎng)期以來(lái),脂肪組織一直被認(rèn)為是能量貯備的終末分化器官。而隨著眾多脂肪細(xì)胞因子相繼發(fā)現(xiàn),脂肪組織旺盛的內(nèi)分泌功能逐漸為人們所認(rèn)識(shí),脂肪組織作為一個(gè)內(nèi)分泌器官已成為學(xué)術(shù)界的共識(shí)。脂肪細(xì)胞因子在調(diào)節(jié)整個(gè)機(jī)體的能量代謝平衡上發(fā)揮重要的作用,分泌失調(diào)將引起多種代謝紊亂,與胰島素抵抗(insulin resistance,IR)、肥胖、糖尿病、冠心病、高脂血癥等密切相關(guān),被視為IR和心血管疾病可能的中間環(huán)節(jié)。
　　 內(nèi)脂素(visfa

2、tin)作為一種新發(fā)現(xiàn)的脂肪細(xì)胞因子,其主要來(lái)源于內(nèi)臟脂肪組織,具有擬胰島素活性,可降低血糖并能促進(jìn)脂肪的合成與聚集。除與肥胖、胰島素抵抗等代謝紊亂相關(guān),內(nèi)脂素還具有其它多種生物學(xué)功能,可能與易損斑塊、血管增生、內(nèi)皮功能紊亂、炎癥等密切相關(guān),參與了冠心病的病理生理過(guò)程,已成為近年來(lái)研究的熱點(diǎn)。
　　 內(nèi)脂素發(fā)揮擬胰島素的降低血糖作用,因它可與胰島素受體上的非胰島素的結(jié)合位點(diǎn)相結(jié)合,激活胰島素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路,促進(jìn)肌肉與脂肪細(xì)胞對(duì)葡萄

3、糖的攝取,同時(shí)抑制肝葡萄糖輸出。胰島素抵抗是2型糖尿病重要的發(fā)病機(jī)制之一,內(nèi)脂素與2型糖尿病相關(guān)性的臨床研究越來(lái)越深入。國(guó)外學(xué)者研究發(fā)現(xiàn),2型糖尿病患者血漿內(nèi)脂素濃度較非糖尿病患者增加[15]。有研究發(fā)現(xiàn),在體外培養(yǎng)的3T3-L1脂肪細(xì)胞中,地塞米松能上調(diào)內(nèi)脂素mRNA的表達(dá),而生長(zhǎng)激素、TNF-α、異丙腎上腺素則不同程度的抑制其表達(dá),且呈明顯的時(shí)間和劑量依賴(lài)性。胰島素抵抗導(dǎo)致的激素水平的改變能調(diào)節(jié)內(nèi)脂素mRNA的表達(dá),提示內(nèi)脂素可能是

4、肥胖和胰島素抵抗的聯(lián)系紐帶。有學(xué)者通過(guò)對(duì)正常人群實(shí)行葡萄糖鉗夾試驗(yàn)證實(shí),短時(shí)間(4 h)葡萄糖濃度增加,可使機(jī)體血循環(huán)中內(nèi)脂素表達(dá)水平代償性升高,而外源性胰島素或生長(zhǎng)抑素的輸注可以阻斷高糖對(duì)內(nèi)脂素的誘導(dǎo)效應(yīng)[18]。目前,關(guān)于內(nèi)脂素的研究多集中在脂肪細(xì)胞中。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn),內(nèi)脂素在骨骼肌、骨髓基質(zhì)細(xì)胞、肝臟中均有表達(dá)。而心肌細(xì)胞是否表達(dá)內(nèi)脂素,高血糖刺激對(duì)心肌細(xì)胞內(nèi)脂素表達(dá)起了什么作用尚無(wú)相關(guān)報(bào)道。本研究通過(guò)觀察不同濃度的葡萄糖對(duì)體外培養(yǎng)的

5、新生大鼠心肌細(xì)胞內(nèi)脂素表達(dá)的影響,探討內(nèi)脂素在糖尿病發(fā)病過(guò)程中的作用,為臨床糖尿病合并心血管疾病的診治提供新的思路。
　　 方法:無(wú)菌試驗(yàn)條件下不分性別的提取新生2-3天的Sprague-Dawley(SD)大鼠心肌細(xì)胞進(jìn)行原代培養(yǎng),48小時(shí)含血清培養(yǎng),24小時(shí)撤血清培養(yǎng)之后,選取生長(zhǎng)狀態(tài)好的細(xì)胞隨機(jī)分為11組。葡萄糖六組:①低糖對(duì)照組(5.5mmol/L)、②高糖25mmol/L組、③高糖30mmol/L組、④高糖50mmoo

6、l/L組、⑤高糖80mmol/L組、⑥高滲對(duì)照組。不同作用時(shí)間五組①6h組、②12h組、⑧24h組、④48h組、⑤對(duì)照組。以不同濃度的葡萄糖干預(yù)48小時(shí)及高糖(50mmol/L)作用不同時(shí)間后,以GAPDH為內(nèi)對(duì)照,應(yīng)用RT-PCR和western-blot技術(shù)檢測(cè)心肌細(xì)胞中內(nèi)脂素mRNA和蛋白的表達(dá)水平。
　　 結(jié)果:(1)隨葡萄糖濃度增加,大鼠心肌細(xì)胞內(nèi)脂素mRNA及蛋白的表達(dá)明顯增加,且高糖對(duì)于心肌細(xì)胞內(nèi)脂素表達(dá)的影響是由

7、于葡糖糖濃度,而非由滲透壓所造成。(2)心肌細(xì)胞在高糖作用24h內(nèi),內(nèi)脂素mRNA及蛋白的表達(dá)隨作用時(shí)間的延長(zhǎng)而明顯增加;作用超過(guò)24h,內(nèi)脂素mRNA及蛋白的表達(dá)相對(duì)于作用24h時(shí)無(wú)顯著變化。
　　 結(jié)論:心肌細(xì)胞可以表達(dá)內(nèi)脂素。高濃度的葡萄糖可促進(jìn)體外培養(yǎng)的心肌細(xì)胞內(nèi)脂素的表達(dá)水平的增加。隨著葡萄糖濃度的升高,心肌細(xì)胞內(nèi)脂素的表達(dá)水平亦逐漸增加。高糖對(duì)于心肌細(xì)胞內(nèi)脂素表達(dá)的影響是由于葡萄糖濃度,而非滲透壓造成。在高糖作用24