PKR-like在鯽魚和草魚組織中的表達(dá)特性分析.pdf

1、依賴雙鏈RNA(dsRNA)激活的蛋白激酶(PKR)是脊椎動物中由干擾素(Interferon，IFN)介導(dǎo)的抗病毒防御機(jī)制的重要組成部分，屬絲氨酸-蘇氨酸蛋白激酶超家族和eIF-2α激酶家族，在哺乳動物細(xì)胞中廣泛存在。鯽魚類PKR基因(CaPKR-like)是第一個報(bào)道的非哺乳類PKR同源物。 為了解CaPKR-like在非哺乳動物各組織中的表達(dá)活性，本文采用已經(jīng)表達(dá)的Zα結(jié)構(gòu)域融合多肽(P<,Zα1 Zα2>)，經(jīng)過親和層析

2、純化并免疫家兔，制備了CaPKR-likeN-端包含Zα結(jié)構(gòu)域的多克隆抗體。并利用該抗體檢測CaPKR-like在鯽魚與草魚的正常組織和經(jīng)Poly I：C誘導(dǎo)后的組織表達(dá)特性。Western blots顯示在未經(jīng)誘導(dǎo)的鯽魚和草魚各個所檢組織(腦、脾、肝、心、肌肉、腎、腸、皮膚)中該基因表達(dá)水平非常低，但是經(jīng)Poly I：C免疫誘導(dǎo)一周后，在鯽魚和草魚等8種組織中有較強(qiáng)的PKR-like蛋白產(chǎn)生。其中，在鯽魚中心臟、肝臟、脾臟、腎、肌肉等

3、組織中該基因表達(dá)較強(qiáng)，而在腸道和皮膚的表達(dá)略弱。在草魚中腦、心臟、肌肉、肝臟、皮膚等組織中該基因表達(dá)較強(qiáng)，而在脾臟、腸道、腎等組織中表達(dá)略弱。 為了解CaPKR-like在鯽魚細(xì)胞中的定位，采用Poly I：C免疫誘導(dǎo)了鯽魚組織，利用免疫熒光細(xì)胞化學(xué)技術(shù)對PKR基因在鯽魚組織中的表達(dá)進(jìn)行了分析，結(jié)果顯示PKR基因在經(jīng)Voly I：C誘導(dǎo)一周后的鯽魚細(xì)胞比在未經(jīng)誘導(dǎo)的鯽魚細(xì)胞中表達(dá)明顯。且發(fā)現(xiàn)CaPKR-like主要定位在鯽魚細(xì)胞