重組草魚干擾素對鯽魚的免疫保護.pdf

1、I型干擾素是先天性免疫應答的一類重要的細胞因子，在抗病毒和抗癌中都有廣泛地效用。鯽魚與草魚的I型干擾素有很高的同源性。在我們先前的實驗中，重組草魚干擾素的免疫保護作用以及抗病毒功能已經在草魚細胞和組織中得到了驗證。為了探究重組草魚干擾素對鯽魚的免疫保護作用以及它的作用機制，我們用poly I:C建立了一個病毒感染鯽魚模型，然后用重組草魚干擾素進行免疫保護實驗。
　　在本實驗中，我們構建了pBV220-CiIFN重組質粒并且用大腸桿

2、菌BL21(DE3) pLysS作為表達重組草魚干擾素的宿主菌。采用原核表達的方法42℃誘導4 h獲得大量的rCiIFN蛋白，進一步通過切膠回收的方法得到純化的蛋白。最后經過SDS-PAGE檢測純化后的rCiIFN大小約為21kDa，蛋白濃度測定試劑盒測出濃度為330μg/ml。將蛋白稀釋到合適濃度，為了評估在poly I:C下rCiIFN對鯽魚體內的保護效果，我們采用口服的方法免疫鯽魚。在給鯽魚腹腔注射poly I:C之前，分別連續(xù)投

3、喂1d、2d和3d拌有rCiIFN蛋白的飼料，并確保每克魚體重能攝入1μg的重組蛋白。結果表明，與對照組的鯽魚相比，口服免疫的方法確實能對鯽魚起到更好的保護效果，其中連續(xù)投喂3d的鯽魚相對存活率是54.29％，要高于連續(xù)投喂2d和1d的存活率，連續(xù)投喂2d和1d的鯽魚存活率分別是47.83%和38.81%。然而對照組的存活率與實驗組的相比則低得多，投喂了1d、2d和3d的存活率分別為16.25%、13.75%和12.50%。
　　

4、為進一步了解重組草魚干擾素對鯽魚免疫保護的分子機理，我們通過實時熒光定量PCR的方法分析rCiIFN對PKR以及IFN的誘導表達效果。在鯽魚腹腔注射rCiIFN蛋白的24h、48h、72h以及對照組腹腔注射PBS后分別提取鯽魚肝、腸、心、腎、鰓五個組織的總RNA，之后反轉得到其cDNA。采用實時熒光定量PCR的方法檢測鯽魚五個組織中IFN以及PKR的表達情況。通過與對照組相應組織中IFN以及PKR的表達量相比，實驗組腹腔注射了rCiIF