糖尿病結(jié)腸動(dòng)力障礙平滑肌細(xì)胞凋亡機(jī)制及胰島素對(duì)其干預(yù)的研究.pdf

1、目的：
　　 糖尿病結(jié)腸動(dòng)力障礙是糖尿病(diabetes mellitus，DM)常見(jiàn)的并發(fā)癥，嚴(yán)重影響著患者的生活質(zhì)量，其發(fā)病機(jī)制尚不完全清楚，可能與自主神經(jīng)、Cajal間質(zhì)細(xì)胞(interstitial cells of Cajal，ICC)及平滑肌病變、高血糖等多種因素異常有關(guān)。近來(lái)研究發(fā)現(xiàn)細(xì)胞凋亡在DM及其部分并發(fā)癥的發(fā)生中起重要作用。本研究對(duì)DM大鼠進(jìn)行胰島素干預(yù)，采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法，檢測(cè)各組平滑肌細(xì)胞中Bax

2、、Bcl-2、Caspase-3的表達(dá)，從mRNA水平研究平滑肌凋亡在糖尿病結(jié)腸動(dòng)力障礙發(fā)病機(jī)制中的作用，及胰島素、血糖對(duì)DM結(jié)腸平滑肌凋亡的影響機(jī)制。內(nèi)容
　　 健康雄性SD大鼠隨機(jī)分為正常組和造模組。造模組大鼠尾靜脈一次性注射鏈脲佐菌素(streptozotocin，STZ)40mg/kg，72h后尾靜脈采血，測(cè)得血糖≥16.7mmol/L且能維持1周以上者為造模成功。造模成功的大鼠隨機(jī)分為DM6周組(C組)、DM10周組(

3、D組)、胰島素第0周干預(yù)6周殺組(E組)、胰島素第0周干預(yù)10周殺組(F組)、胰島素第6周干預(yù)10周殺(G組)，正常組分為正常6周組(A組)、正常10周組(B組)。E、F組大鼠自造模成功后每天皮下注射魚(yú)精蛋白鋅胰島素16U/kg，G組大鼠造模成功后飼養(yǎng)6周后注射，A組、C組、E組于成模第6周處死，其余組于第10周處死。以HE染色法觀察結(jié)腸組織平滑肌的變化，采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法對(duì)各組大鼠結(jié)腸平滑肌細(xì)胞中Bax、Bcl-2、Caspas

4、e-3基因的轉(zhuǎn)錄水平進(jìn)行檢測(cè)。
　　 方法：
　　 1.實(shí)驗(yàn)方法：糖尿病模型的建立；石蠟包埋技術(shù)；HE染色；細(xì)胞總RNA提??；實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)。
　　 2.統(tǒng)計(jì)方法：所有數(shù)據(jù)通過(guò)SPSS16.0軟件進(jìn)行處理，經(jīng)Levene檢驗(yàn)驗(yàn)證方差齊性。多組間均數(shù)比較采用單因素方差分析，多組問(wèn)均數(shù)兩兩比較采用SNK-q檢驗(yàn)。P<0.05被認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果：
　　 1.用STZ復(fù)制糖尿病模型成

5、功，造模后監(jiān)測(cè)血糖均≥16.7mmol/1、血清胰島素水平下降、胃腸推進(jìn)率減慢，糖尿病結(jié)腸動(dòng)力障礙模型復(fù)制成功。
　　 2.DM組與正常對(duì)照組比較：大鼠結(jié)腸平滑肌變薄，細(xì)胞數(shù)目減少，Bcl-2的表達(dá)減少，Bax、Caspase-3的表達(dá)增加，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)，并且隨著DM病程的進(jìn)展，改變?cè)矫黠@。
　　 3.胰島素干預(yù)組較DM組大鼠結(jié)腸平滑肌增厚，細(xì)胞數(shù)目增多，Bcl-2的表達(dá)增加，Bax、Caspase-3的

6、表達(dá)減少，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)，并且對(duì)DM大鼠早期進(jìn)行胰島素干預(yù)，大鼠結(jié)腸平滑肌、Bcl-2、Bax、Caspase-3的變化更明顯，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1.DM組大鼠血糖升高，胰島素水平下降，平滑肌變薄，細(xì)胞數(shù)目減少，Bcl-2表達(dá)減少，Bax、Caspase-3表達(dá)增多，且隨著DM進(jìn)程變化明顯。
　　 2.胰島素干預(yù)組較DM組大鼠結(jié)腸平滑肌增厚，細(xì)胞數(shù)目多，Bcl-2

7、的表達(dá)增加，Bax、Caspase-3的表達(dá)減少，并且對(duì)DM大鼠早期進(jìn)行胰島素干預(yù)，大鼠結(jié)腸平滑肌、Bcl-2、Bax、Caspase-3的變化更明顯
　　 以上結(jié)果表明Bcl-2在DM組表達(dá)減少，胰島素干預(yù)組表達(dá)增加，Bax、Caspase-3在DM組表達(dá)增加，胰島素干預(yù)組表達(dá)減少。由于Bcl-2、Bax、Caspase-3是細(xì)胞凋亡中的關(guān)鍵基因，因此本實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明平滑肌細(xì)胞凋亡是糖尿病結(jié)腸動(dòng)力障礙發(fā)病機(jī)制之一，胰島素具有抗凋