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文檔簡介
1、目的:探討去神經(jīng)骨骼肌使用蛋白酶體抑制劑MG-132后骨骼肌成肌調(diào)節(jié)因子Myf-5的表達(dá)情況。
方法:取SD大鼠54只,隨機(jī)分成3組,即A組:空白對照組;B組:去神經(jīng)組;C組:去神經(jīng)MG-132干預(yù)組;每組18只。A組不切斷坐骨神經(jīng),僅作假手術(shù);B組和C組全部制作成標(biāo)準(zhǔn)的右側(cè)坐骨神經(jīng)離斷,腓腸肌失神經(jīng)支配模型,并在C組大鼠失神經(jīng)腓腸肌局部多點(diǎn)注射濃度為20μmol/L的蛋白酶體抑制劑MG-132100μL,1次/d。分別于
2、去神經(jīng)第2d、7d、28d,用脊椎脫臼法處死大鼠,解剖并分離出右小腿的腓腸肌,切取肌肉標(biāo)本置于-80℃冰箱凍存,留待28d后統(tǒng)一檢測。用RT-PCR法檢測Myf-5的mRNA:以GAPDH作為內(nèi)參照,做半定量檢測。取樣本組織50mg勻漿后用抽提試劑進(jìn)行總RNA抽提,然后用MBI的RT-PCR試劑盒,按樣本RNA2μg,20μl體系進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄。Myf-5的引物通過primer5.0引物設(shè)計(jì)軟件設(shè)計(jì),其上游引物:5-TGCCATCCGCTA
3、CATTGAGAG-3’,下游引物:5’-CCGGGGTAGCAGGCTGTGAGTTG-3’,作為內(nèi)參照的GAPDH的引物由山西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)中心提供,其上游引物:5’-TCCCTCAAGATTGCTAGCAA-3’,下游引物:5’-AGATCCACAACGGATACATT-3’,共308bp。反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)按50μl.體系,反應(yīng)條件為:96℃,2’,1cycle。9℃,30’’;Tm(Myf-553℃)/(GAPDH50℃),30
4、";72℃,236cycle。Western-blot檢測Myf-5蛋白表達(dá)的變化,并用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
結(jié)果:去神經(jīng)組與去神經(jīng)MG-132干預(yù)組Myf-5的mRNA和蛋白質(zhì)在去神經(jīng)支配后第2d、7d、28d均表達(dá)上調(diào)與空白對照組比較都有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01);去神經(jīng)組與去神經(jīng)MG-132干預(yù)組Myf-5的mRNA和蛋白質(zhì)在去神經(jīng)支配后第2d、7d、28d的比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01)。
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