冷誘導(dǎo)RNA結(jié)合蛋白對大鼠體外循環(huán)的心肌保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:心臟外科術(shù)后心功能是影響患者預(yù)后情況的重要因素之一。體外循環(huán)是大部分心臟手術(shù)必不可少的環(huán)節(jié)，但仍然在體外循環(huán)過程中會(huì)產(chǎn)生炎癥反應(yīng)以及造成臟器的損傷。冷誘導(dǎo)RNA結(jié)合蛋白(Cold-induced RNA bending Protein，CIRP)在低溫、紫外線、缺氧等應(yīng)激條件下，被誘導(dǎo)表達(dá)通過細(xì)胞核遷移至細(xì)胞質(zhì)而廣泛表達(dá)，通過與多種mRNA結(jié)合，增加mRNA的穩(wěn)定性從而抗細(xì)胞凋亡等發(fā)揮細(xì)胞保護(hù)作用。本實(shí)驗(yàn)通過建立大鼠體外循環(huán)模型研

2、究低溫缺血缺氧條件下的CIRP對大鼠心肌的保護(hù)作用及作用機(jī)制。其對于心肌的保護(hù)是值得研究的方向。
　　研究方法:本研究構(gòu)建CIRP慢病毒過表達(dá)載體，通過尾靜脈注射CIRP慢病毒過表達(dá)載體轉(zhuǎn)染大鼠，并對大鼠構(gòu)建立體外循環(huán)模型。雄性SD大鼠(300g-350g)分為假手術(shù)組組(RC)、正常大鼠體外循環(huán)組(RCPB)、轉(zhuǎn)染陰性病毒體載體外循環(huán)組(RNCCPB)、轉(zhuǎn)染CIRP慢過表達(dá)病毒載體體外循環(huán)大鼠組（RCIRPCPB）。通過股動(dòng)脈、

3、頸靜脈建立體外循環(huán)，轉(zhuǎn)中流量100-150mL/kg/min，降溫至15-18℃后心臟停跳，停跳1h后復(fù)溫完成體外循環(huán)。對體外循環(huán)后大鼠術(shù)后24h、72h的心功能進(jìn)行評估。術(shù)后72h后處死大鼠，取大鼠心肌組織，利用Real-time PCR檢測組織CIRP轉(zhuǎn)染情況。利用Tunel及Western Blot方法檢測凋亡相關(guān)指標(biāo)以及評價(jià)氧化應(yīng)激相關(guān)指標(biāo)。
　　結(jié)果:成功建立轉(zhuǎn)染CIRP過表達(dá)大鼠模型，體外循環(huán)后各組大鼠心肌組織進(jìn)行Re

4、al-time PCR提示轉(zhuǎn)染CIRP過表達(dá)慢病毒載體后RCIRPCPB組CIRP基因較RCPB、RNCCPB組明顯升高。Western Blot檢測RCIRPCPB組心肌組織中CIRP表達(dá)明顯高于RCPB、RNCCPB組(P＜0.01)。心肌組織免疫組化提示CIRP表達(dá)分布于細(xì)胞質(zhì)中，轉(zhuǎn)染CIRP慢病毒過表達(dá)載體后心肌CIRP表達(dá)明顯升高（P＜0.01）。TUNEL染色提示RCIRPCPB組心肌組織凋亡較RCPB(P＜0.01)和RN

5、CCPB(P＜0.01)明顯減少。Western Blot檢測各組大鼠心肌組織凋亡相關(guān)指標(biāo)Bax、Survivin、Caspase-3表達(dá)情況，RCIRPCPB組大鼠組心肌Bax表達(dá)較RCPB(P=0.013)和RNCCPB(P＜0.01)明顯降低，Survivin表達(dá)明顯高于RCPB(P=0.032)和RNCCPB(P=0.037)，Caspase-3 p12表達(dá)明顯低于RCPB(P＜0.01)和RNCCPB(P＜0.01)。AKT在

6、各組間未見明顯差異，RCIRPCPB組中p-AKT在明顯高于RC(P＜0.01)、RCPB(P＜0.01)和RNCCPB(P＜0.01)，RCPB和RNCCPB無明顯差異。體外循環(huán)后3天評估大鼠心功能EF值，RCIRPCPB組術(shù)后24h EF值RCPB(P＜0.01)和RNCCPB(P＜0.01)升高。
　　結(jié)論:經(jīng)尾靜脈注射CIRP慢病毒后可建立穩(wěn)定轉(zhuǎn)染大鼠心肌的模型，經(jīng)體外循環(huán)逐漸降溫，心肌細(xì)胞中CIRP明顯增加，從而促使心肌